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[发明专利]一种用于研究蛋白质结构或蛋白质相互作用的分析方法-CN201610453993.7有效
发明人：张丽华;方菲;赵群;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2016-06-22 - 公布日： 2020-08-11 - 主分类号： G01N27/62 文献下载
摘要：本发明涉及用于研究蛋白质结构或蛋白质相互作用的分析方法。使用两侧具有反应活性基团且具有可断裂基团的交联剂将细胞内蛋白质复合体进行交联并酶解，取一部分酶解产物进行衍生化反应后进入质谱分析；另一部分酶解产物使用化学法断裂交联剂后，使用富集材料将肽段进行富集，将富集出的肽段洗脱后进入质谱分析，根据搜库结果可确定发生交联的肽段，从而建立肽段库。通过交联肽段质谱谱图中确定的发生交联肽段的N端氨基酸信息可在肽段库中找到候选肽段，结合交联肽段质谱谱图m/z和肽段特征离子可确定交联肽段序列，从而获取蛋白质结构及蛋白质相互作用信息。该方法具有操作简便等优点并应用于蛋白质的结构分析及蛋白质复合体相互作用的分析。
一种用于研究蛋白质结构相互作用分析方法

[发明专利]一种N-磷酸化肽段和蛋白质富集材料及其制备和应用-CN201611043532.9有效
发明人：张丽华;胡晔晨;江波;翁叶靖;高航;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2016-11-21 - 公布日： 2020-08-11 - 主分类号： B01J20/22 文献下载
摘要：本发明涉及一种能在中性条件下识别N‑磷酸化肽段和蛋白质的新型硅胶材料及其在N‑磷酸化肽段和蛋白质富集中的应用：采用种子生长法制备无孔硅胶微球，通过模板引导溶解和再沉积的方法形成核壳微球初始壳层，最后经过酸回流得到具有垂直孔道的亚二微米核壳硅胶。通过N‑叔丁氧羰基‑L‑酪氨酸与N,N′‑二甲基吡啶胺反应形成支撑分子，在其上络合金属离子形成磷酸识别功能分子。最后将磷酸识别功能分子与具有垂直孔道的亚二微米核壳硅胶通过酰胺键共价结合得到新型磷酸识别功能硅胶材料。该新型磷酸识别功能硅胶材料能够在中性缓冲体系下快速地对N‑磷酸化肽段和蛋白质进行特异性富集。
一种磷酸化蛋白质富集材料及其制备应用

[发明专利]一种硫巯化多肽的富集方法-CN201510902151.0有效
发明人：张丽华;袁辉明;朱旭东;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2015-12-09 - 公布日： 2020-08-11 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种硫巯化多肽富集方法及应用，以多氨基树枝状聚合物为载体，通过共价修饰碘乙酸‑N‑琥珀酰胺酯，制备成选择性与含巯基多肽反应的水溶性高分子化合物，通过将该化合物与蛋白质酶解产物充分混合，并置于超滤膜上，在高速离心下，选择性将含巯基多肽截留在膜上，最后在膜上加入二硫键还原剂在一定温度下选择性将硫巯化多肽从高分子化合物上释放，通过高速离心，即获得硫巯化多肽。该方法具有操作简单、通量高，选择性好等优点，应用于复杂蛋白质组样品中规模化硫巯化修饰多肽的富集。
一种硫巯化多肽富集方法

[发明专利]可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂的应用和肝癌药物-CN201910079616.5在审
发明人：张丽华;褚宏伟;赵宝锋;杨开广;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2019-01-28 - 公布日： 2020-08-04 - 主分类号： A61K45/00 文献下载
摘要：本发明涉及抑制肝癌转移的方法和试剂。本发明提供了一种可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂在制备治疗肝癌转移药物中的应用。肝癌转移是影响肝癌患者预后的重大障碍。本发明提供了一种可抑制肝癌转移的方法和试剂，用于治疗肝癌转移，提高肝癌患者预后效果。
可抑制 calb2 蛋白表达抑制剂应用肝癌药物

[发明专利]PLIN2抑制剂的应用和治疗肿瘤药物混合物-CN201811430356.3在审
发明人：张丽华;赵宝锋;孙瑞;褚宏伟;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-28 - 公布日： 2020-06-05 - 主分类号： A61K31/7105 文献下载
摘要：本发明涉及抑制肿瘤耐药的方法和试剂。本发明首次揭示了PLIN2与肿瘤耐药密切相关，PLIN2抑制剂可以作为降低肿瘤耐药性的用途。化疗仍是肿瘤治疗的主要手段之一，化疗药物耐药性是影响肿瘤患者治疗效果的重大障碍。本发明提供了一种可抑制肿瘤耐药的方法和试剂，为克服肿瘤耐药，提高疗效提供新的机理。
plin2 抑制剂应用治疗肿瘤药物混合物

[发明专利]PLIN2及定量检测PLIN2的试剂的应用和试剂盒-CN201811430343.6在审
发明人：张丽华;赵宝锋;孙瑞;褚宏伟;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-28 - 公布日： 2020-06-05 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明涉及PLIN2作为肿瘤耐药检测分子靶点的应用，本发明发现肿瘤耐药细胞株中PLIN2表达量上调，定量检测PLIN2可作为检测肿瘤耐药的用途。化疗仍是肿瘤治疗的主要手段之一，化疗药物耐药性是影响肿瘤患者治疗效果的重大障碍。本发明提供了一种可诊断肿瘤耐药的标志物。
plin2 定量检测试剂应用试剂盒

[发明专利]一种基于病毒鉴定的质谱数据库建立方法-CN201811412814.0在审
发明人：张丽华;韩国斌;刘路宽;杨开广;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2020-06-02 - 主分类号： G01N27/62 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于病毒鉴定的质谱数据库建立方法及其应用。本数据库的建立主要有两部分：首先是针对样品的处理方法，其目的是为了得到较好的待测样品的一级质谱图；其次数据库建立，该数据库主要针对待测样品的一级质谱图,以及低分子量端和高分子量端的特征图谱建立。本发明对于病毒鉴定有显著效果，具有高通量分析检测及鉴定的优势，并且可用于生物安全、公共卫生领域。
一种基于病毒鉴定数据库建立方法

[发明专利]一种阵列高通量蛋白质样品预处理装置-CN201811406709.6在审
发明人：张丽华;戴忠鹏;袁辉明;李一岚;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2020-06-02 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明涉及一种阵列高通量蛋白质样品预处理装置，是一种可对多个蛋白质样品同时进行在线变性和还原、除盐以及酶解的样品处理系统，包括：蛋白质处理模块，电源模块，加热控制模块，泵及泵控制模块。本发明的特点是在单路蛋白质预处理仪的基础上,增加到八路同时处理,把单路装置的每个操作模块,在电路、控制及液体流路都分别重新做了优化设计，用最优的方式把各个模块集成到一个操作装置中同时控制八路操作。该装置操作简单,控制精确可靠,样品处理量大,可满足大批量样品的检测要求。
一种阵列通量蛋白质样品预处理装置

[发明专利]用于色谱分离的杂化硅胶整体材料的制备及材料和应用-CN201610453946.2有效
发明人：张丽华;吴慈;梁玉;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2016-06-22 - 公布日： 2020-06-02 - 主分类号： B01J20/281 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于色谱分离的杂化硅胶整体柱材料及其制备和应用，以双(三甲氧基硅基)乙烷和四甲氧基硅烷作为单体，以一定浓度的醋酸溶液为溶剂兼催化剂，采用非离子型表面活性剂作为致孔剂，在经刻蚀处理过的石英毛细管内原位聚合，然后通入尿素溶液加热分解成氨水对材料进行扩孔，陈化，得到的多孔杂化整体材料基质孔径大小可调且分布均匀，比表面积大，骨架中含有C‑C键，耐受pH范围宽。在该整体材料基质表面进行有机官能团的功能化修饰，制备出的材料能用于高效液相色谱分离。
用于色谱分离硅胶整体材料制备应用

[发明专利]一种用于序列测定的基于固定化肽酶反应器酶解方法-CN201811389990.7在审
发明人：张丽华;杨超;单亦初;杨开广;吴琼;张玉奎;梁振 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-21 - 公布日： 2020-05-29 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于序列测定的基于固定化肽酶反应器酶解方法及其应用，包括：肽酶的固定化；利用固定化酶反应器酶解多肽。首先将氨肽酶和羧肽酶分别制成固定化酶反应器，再利用固定化酶反应器从多肽的C端或者N端进行酶解，从而得到氨基酸序列连续的多肽酶解产物。本发明优点是：使用固定化酶反应器酶解效率高；使用该方法可获得酶解后氨基酸序列连续的产物；方法所制得的固定化酶反应器易于保存，可重复使用。
一种用于序列测定基于固定肽酶反应器方法

[发明专利]一种非抗体依赖的蛋白质甲基化修饰富集分析方法-CN201811397614.2在审
发明人：张丽华;孙明伟;梁振;单亦初;赵宝锋;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-22 - 公布日： 2020-05-29 - 主分类号： G01N30/88 文献下载
摘要：本发明涉及一种非抗体依赖的蛋白质甲基化修饰富集分析新方法及应用，包括Lys‑C/Trypsin/Arg‑C连续酶切、酶切肽段N段氨基的固定、甲基化修饰肽段的选择性释放及LC‑MS/MS分析及数据解析甲基化修饰位点信息。首先对含有蛋白质甲基化修饰的样本进行Lys‑C/Trypsin/Arg‑C多种酶切消化，然后将连续酶切得到的肽段与氨基反应活性材料反应，实现肽段的固定，最后利用特异性酶对固定肽段中含有甲基化修饰的赖氨酸和精氨酸N端肽键特异性酶切。本发明的优点是实现了多种类型低丰度蛋白质甲基化修饰的同时富集，包括赖氨酸二甲基化修饰、赖氨酸三甲基化修饰、精氨酸单甲基化修饰以及精氨酸二甲基化修饰。
一种抗体依赖蛋白质甲基化修饰富集分析方法

[发明专利]一种基于胍基化标记的蛋白质N端肽段反向富集的方法-CN201811397617.6在审
发明人：张丽华;孙明伟;单亦初;梁振;杨开广;梁玉;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-22 - 公布日： 2020-05-29 - 主分类号： G01N30/88 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于胍基化标记的蛋白质N末端肽段反向富集的分析方法及应用，包括赖氨酸ε‑氨基及多肽N端氨基的胍基化标记、胍基化试剂的去除，胍基化赖氨酸C端肽键的胰蛋白酶酶切及非蛋白质N末端肽段的选择性去除。首先建立能够高效胍基化标记赖氨酸ε‑氨基及多肽N端氨基的标记条件及过量标记试剂的选择性去除，然后将优化好的标记条件用于蛋白质中的N端氨基和赖氨酸ε‑氨基胍基化标记，利用氨基活性材料与酶切产生肽段的N端氨基反应，从而实现蛋白质N端肽段反向富集。本发明的优点是高效的赖氨酸ε‑氨基及肽端N段氨基胍基化标记、高效的离子化率，提高了蛋白质N端肽段反向富集率及鉴定深度。
一种基于胍基化标记蛋白质端肽反向富集方法

[发明专利]介孔核壳硅球为载体双二甲基吡啶胺双锌功能材料的制备和应用-CN201811390347.6在审
发明人：张丽华;贺映云;胡晔晨;江波;杨开广;李潇;张晓丹;赵宝锋;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-21 - 公布日： 2020-05-29 - 主分类号： B01J20/22 文献下载
摘要：本发明涉及一种组氨酸磷酸化肽段富集的以亚2μm介孔核壳硅球为载体的双二甲基吡啶胺双锌功能材料。根据N端保护的酪氨酸甲酯与2,2'‑吡啶甲基胺发生曼尼希反应，制备双二甲基吡啶胺分子。采用种子生长法制备无孔硅胶，在无孔硅胶表面可控生长壳层，煅烧生成亚2μm介孔核壳硅球。以亚2μm介孔核壳硅球为载体，对核壳硅球进行氨基官能化，与双二甲基吡啶胺分子上修饰的羧基发生酰胺缩合反应。在双二甲基吡啶胺分子上络合锌离子，制备双二甲基吡啶胺双锌功能材料，在弱酸条件下用于组氨酸磷酸化肽段的富集。在该方法中，以亚2μm介孔核壳硅球为载体的双二甲基吡啶胺双锌功能材料成功用于组氨酸磷酸化肽段富集。
介孔核壳硅球载体二甲基吡啶胺双锌功能材料制备应用

[发明专利]一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法-CN201611020027.2有效
发明人：张丽华;吴琼;袁辉明;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2016-11-21 - 公布日： 2020-01-07 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法。所述的方法分为两条路线：路线A和路线B。其中，路线A是把蛋白酶解产生的肽段与碘乙酰胺的小球孵育，对巯基肽段和硫巯基肽段进行富集后；通过还原剂将硫巯基肽段的二硫键还原释放，进而用可断裂的同位素亲和标签标记释放下来的硫巯基肽段，最后使用裂解液将可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂。路线B是用可断裂的同位素亲和标签标记含巯基和硫巯基的蛋白、蛋白酶解、亲和富集巯基肽段和硫巯基肽段；最后用裂解液将连接在巯基肽段和硫巯基肽段上的可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂。该方法具有选择性好、假阳性低等优点，可实现复杂蛋白质组样品中规模化硫巯化肽段的定性与定量。
巯基肽亲和标签同位素可断裂肽段巯化翻译后修饰定性蛋白酶解连接臂裂解液巯基断裂复杂蛋白质碘乙酰胺亲和富集释放二硫键规模化还原剂假阳性孵育富集小球还原蛋白

[发明专利]一种用于特异性识别细胞的印迹材料及其制备和应用-CN201510726565.2有效
发明人：张丽华;刘路宽;杨开广;李森武;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2015-10-30 - 公布日： 2019-11-12 - 主分类号： C08J9/26 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于特异性识别细胞的印迹材料及其制备和应用。所述的细胞印迹材料以细胞为模板，采用细胞培养与细胞固定技术将其固定于基质材料表面，通过在基质材料表面固化预聚合体系，然后分离除去基质材料，再去除固化后聚合物表面的模板细胞制备得到。该细胞印迹材料具有高选择性和高稳定性，并被进一步应用于细胞的识别、捕获与富集中。
细胞基质材料表面特异性识别制备和应用细胞印迹印迹材料固化细胞培养聚合物表面高稳定性高选择性基质材料细胞固定细胞制备预聚合去除捕获应用