本发明提供一种耐蛋白酶水解的高稳定抗菌肽HW及其制备方法和应用，属于农业畜牧兽医应用领域，其序列如SEQ ID No.1所示；本发明通过合理的将脯氨酸P放置在精氨酸R旁边以保护精氨酸R免受蛋白酶的识别，引入不受蛋白酶识别的组氨酸H为高稳定抗菌肽额外提供正电荷，防止精氨酸R被过多水解导致抗菌肽的正电性不足而失活，制出一条高稳定抗菌肽HW。本发明的高稳定抗菌肽HW在胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶存在下对大肠杆菌具有高效抑菌活性，同时对人血红细胞没有毒性，使其具备成为饲用抗生素替代物的潜力。
本发明提供一种衍生自猪肝脏表达抗菌肽MALK及其制备方法和应用,属于农业畜牧兽医应用领域，其序列如SEQ ID No.1所示。本发明通过截取猪肝脏表达Hepcidin的N端23个氨基酸，得到含有1个净正电荷，疏水值为0.904的多肽，将多肽中Leu强疏水面进行优化，形成(RL)3交替结构；再将肽链L‑S中的S和S‑L中的L均替换为K以提高净正电荷含量，然后将其C端酰胺化，N端乙酰化；本发明的抗菌肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有高效的杀菌作用，而且具有较低的溶血活性和真核细胞毒性，使其具备成为抗生素替代物的发展潜力。
本发明提供一种衍生自猪肝脏的抗菌肽TJH及其制备方法和应用，属于农业畜牧兽医应用领域，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。通过截取猪肝脏抗菌肽LEAP‑2氨基末端的23个氨基酸，得到一条多肽；将带负电氨基酸Asp和Glu均替换为疏水性氨基酸Leu，使其净正电荷含量为6、疏水值为0.519，最后，将C端酰胺化，N端乙酰化，进一步提高净正电荷和稳定性，得到净正电荷含量为7、疏水性为0.519的第二条多肽，命名为抗菌肽TJH。本发明的抗菌肽TJH对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有高效的杀菌作用，而且具有较低的溶血活性和真核细胞毒性，使其具备成为抗生素替代物的发展潜力。
本发明提供一种细胞穿透抗菌肽PW2及其制备方法和应用，属于农业畜牧兽医应用领域，细胞穿透抗菌肽PW2的序列如SEQ ID No.1所示；合成方法示意如下：通过成对Trp‑Trp基序与Pro排列来促进细胞穿透抗菌肽的抗菌活性，其序列为PWWPPWWP；衍生自HIV的细胞穿透肽TAT的氨基酸序列为RKKRRQRRR；两者通过三甘氨酸连接体GGG相连，并命名为PW2。本发明的细胞穿透抗菌肽PW2对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌具有较高的抑菌活性，能够杀灭小鼠巨噬细胞RAW264.7内的金黄色葡萄球菌，使其具备成为饲用抗生素替代物的潜力。
本发明提供一种抑制革兰氏阴性菌的窄谱抗菌肽PC及其制备方法和应用，属于农业畜牧兽医应用领域，其序列如SEQ ID No.1所示；以(RP)3WW(RP)3为基本单元，精氨酸R为抗菌肽提供靶向革兰氏阴性菌的正电荷，色氨酸W为抗菌肽提供杀灭病原体的疏水力，脯氨酸P阻止抗菌肽与革兰氏阳性菌相互作用，提高对革兰氏阴性菌的选择性，将PR串联重复三次；将序列CTKSIPPIC引入到抗菌肽序列中，提高空间位阻，降低抗菌肽破坏革兰氏阳性菌的能力，抗菌肽命名为PC。本发明的窄谱抗菌肽PC对革兰氏阴性菌具有较高的抑菌活性，而对革兰氏阳性菌无抑菌活性，而且对人血红细胞没有毒性，具备成为饲用窄谱抗生素替代物的潜力。
本发明公开一种衍生自羊源抗菌肽RLR及其制备方法和应用，其序列如序列表SEQ ID No.1所示。本发明通过截取羊源抗菌肽ChBac5末端的16个氨基酸，得到一条多肽RFR；将RFR刚性结构的双Pro‑Pro替换为促进α‑螺旋的Ala，并替换末端的Asn为Arg，得到一条多肽RFRR；利用Ile和Leu替换两侧的双Ala‑Ala，并利用Leu替换Phe，最后C端酰胺化得到抗菌肽RLR，本发明的抗菌肽RLR在制备治疗革兰氏阴性菌感染性疾病的药物中的应用。抗菌肽对革兰氏阴性菌有高效的抑制作用和极低的溶血活性，但是不损伤革兰氏阳性菌，使其成为窄谱抗生素替代物的发展潜力。
