本发明公开了一种高产氨基葡萄糖的解淀粉芽孢杆菌工程菌株及其应用,属于生物工程技术领域。以模式菌株解淀粉芽孢杆菌DMS7为基础,通过游离质粒表达含有淀粉酶基因的信号肽的核苷酸序列的密码子优化的N‑乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因,所述淀粉酶基因的信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述密码子优化的N‑乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本申请筛选得到适宜于GlcN生产的酶活高、转化率高、耐高温且稳定性高的具有N‑乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶活性的脱乙酰酶,应用于工业生产中,不会被噬菌体侵蚀,且不需要提取转乙酰酶和酶解后的灭酶等纯化步骤,工艺流程简化。
本发明公开了一种密码子优化的N‑乙酰氨基葡萄糖转移酶基因及其应用,属于生物工程技术领域。本发明以苜蓿中华根瘤菌来源的Nodc基因为出发序列,按照解淀粉芽孢杆菌的密码子偏好性将该N‑乙酰氨基葡萄糖转移酶优化密码子后全基因合成,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。将密码子优化后的N‑乙酰氨基葡萄糖转移酶构建重组载体,转入宿主解淀粉芽孢杆菌中,得到能够发酵生产几丁寡糖的基因工程菌。该基因工程菌胞外发酵液中几丁寡糖浓度达到676mg/L,其中几丁四糖和几丁五糖的含量分别为246mg/L和430mg/L,表明利用该重组菌株可实现胞外合成几丁四糖、几丁五糖等几丁寡糖为主的新发酵工艺。