本发明公开了一种源于嗜酸乳杆菌的NFSAI基因及其制备方法和应用,所述NFSAI基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述NFSAI基因是利用基因合成方法制备而成,将该NFSAI基因转化植物,可提高转基因植物降解TNT的能力,因此,本发明的NFSAI基因可促使植物参与TNT的降解,为植物修复TNT污染提供有益的帮助。
本发明公开了一种抗番茄黄化曲叶病毒的多基因嵌合体AVCTC及其制备方法和应用。所述多基因嵌合体AVCTC的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述多基因嵌合体AVCTC为番茄TMV病毒复制酶基因片段ORF400-700、番茄CMV病毒复制酶基因片段ORF45-345、番茄TYLCV病毒复制酶基因片段ORF420-720、烟草TMV病毒复制酶基因ORF2964-3264和黄瓜CMV复制酶基因ORF2057-2357的嵌合基因,是利用基因合成方法制备而成。将该多基因嵌合体AVCTC转化番茄,进而提高了转基因番茄的抵抗番茄黄化曲叶病毒的能力,为植物抵抗病毒提供有益的帮助。
本发明公开了一种来源于苹果的EPSP合酶多位点突变体及其编码基因与应用。所述突变体含有8个突变位点,其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,其编码的碱基序列如SEQ ID No.2所示。试验表明,本发明的来源于苹果的EPSP合酶多位点突变体及其编码的基因,不仅具有较高的草甘膦抗性,而且还保持着与PEP较强的亲和性,这些特性将为该基因用于转基因作物的培育提供了可能。
本发明涉及一种来源于嗜碱菌的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶基因及应用。所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No 1所示,全长1278bp,其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO2所示。经酶动力学特性分析和功能试验验证,本发明合成的该5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶基因具有较高的草甘膦耐受性,可用于转基因作物的培育中。
本发明公开了一种来源于肺炎克雷伯氏杆菌342(Klebsiella pneumoniae 342)的EPSP合酶基因及其应用。所述的EPSP合酶基因含1284个碱基,编码氨基酸428个;其核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示,其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。本发明的来源于肺炎克雷伯氏杆菌342的EPSP合酶基因具有较高的草甘膦耐受性,可用于转基因作物的培育。
本发明公开了一种适于毕赤酵母表达的高比活植酸酶基因及其制备方法和表达。所述适于毕赤酵母表达的高比活植酸酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示,其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。本发明对来源于大肠杆菌的APP2植酸酶基因按照毕赤酵母偏爱密码子优化,采用连续延伸PCR方法合成植酸酶APPA2基因,并在原核表达载体上采用DNA重组技术建立突变文库,电击转入毕赤酵母,筛选出高比活植酸酶基因APPA2-1。将本发明制备的高比活植酸酶基因构建到毕赤酵母表达载体并转化入毕赤酵母中表达,可用于高比活植酸酶的生产。
本发明公开了一种密码子优化的β-葡萄糖苷酶Mbg1基因及其表达,所述β-葡萄糖苷酶Mbg1基因的核苷酸序列如SEQ ID No 1,其编码的蛋白质序列如SEQ ID No 2。本发明采用连续延伸PCR方法合成所述β-葡萄糖苷酶Mbg1基因,通过将所述基因构建到大肠杆菌表达载体并转化入大肠杆菌EG50中表达出高比活的β-葡萄糖苷酶,其比活达到232umg-1min-1以上,可用于β-葡萄糖苷酶的工业生产中。
本发明涉及一种水生拉恩氏菌的EPSP合酶基因AroA-Ra多位点突变体,具体涉及一种利用DNA分子重排方法和功能互补法对从来自水生拉恩氏菌中编码5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合酶)基因进行改造后的多位点突变体,该改造后的多位点突变体对草甘膦的抗性能力大幅度提高。所述的多位点突变体的核苷酸序列如SEQ ID No1所示,其编码的氨基酸序列如SEQ ID No2所示,该突变体在同一分子上含有6个不同突变位点。本发明的多位点突变体除保持原有EPSP合酶对PEP之间的高亲和性外,还降低了与草甘膦除草剂之间亲和性,从而使该突变体对草甘膦的抗性能力大幅度提高。
本发明涉及一种来自恶臭假单胞菌的黄素单加氧酶基因FMO及其制备方法和应用。具体涉及一种利用功能互补法从来自被芳香族化合物污染的土壤中能以色氨酸为底物合成靛蓝的恶臭假单胞菌克隆、编码黄素单加氧酶(FMO)基因,并将该基因重组到大肠杆菌体内,得到的一种具有黄素单加氧酶活性的重组菌,将其命名为黄素单加氧酶基因FMO,其核苷酸序列如SEQ ID No 1所示,其编码的氨基酸序列如SEQ ID No2所示。在有色氨酸存在的条件下,用该黄素单加氧酶基因FMO可合成靛蓝。