本发明公开了一种来源于南极细菌的耐低温磷脂酶D及其制备方法和应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；该耐低温磷脂酶D基因序列如SEQ IDNO:2所示。本发明获得一株耐低温磷脂酶D的大肠杆菌重组表达菌株，利用该菌株，可实现重组蛋白大量可溶性表达，易于后期纯化及蛋白获得。本发明的表达产物具备有良好的低温储藏稳定性和良好的酶活力，同时对有机溶剂和表面活性剂有一定的耐受性。本发明获得磷脂酶D可适用于磷脂改性，生产磷脂酸及各类天然稀有磷脂和非天然磷脂化合物，应用于生物、食品、医药、化妆品、农业、工业等领域。
本发明涉及一种碱性磷酸酶突变体及其制备方法和应用。该碱性磷酸酶突变体包括：由野生型碱性磷酸酶发生如下突变中的至少一种得到的多肽，野生型碱性磷酸酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，突变包括：第51位的赖氨酸被天冬酰胺替代、第113位的组氨酸被谷氨酸替代。通过将第51位的赖氨酸被天冬酰胺替代或者将第113位的组氨酸被谷氨酸替代，能减弱野生型碱性磷酸酶蛋白分子二聚体界面处的氢键强度，从而减弱了酶的热稳定性，提高酶的热敏感性。经试验验证，与野生型碱性磷酸酶相比，本研究的碱性磷酸酶突变体的稳定性和比活力均有大幅度提高，蛋白比酶活大于1200U/mg，65℃15min可以完全失活。
本发明涉及生物医学领域，具体是一种与TFEB结合并调节TFEB磷酸化和核转位的蛋白多肽。TFEB是一种转录因子，在调控细胞溶酶体生物发生、酸化和功能中具有重要作用。其中，Ser211位点的磷酸化修饰促进TFEB在胞浆中滞留，抑制TFEB的核转位。本发明在PTEN(phosphatase and tensin homolog)蛋白序列的基础上提出一种与TFEB结合的蛋白多肽，它通过对TFEB Ser211位点去磷酸化，促进TFEB核转位，并调节溶酶体新生与功能。本发明对调控TFEB磷酸化和溶酶体新生提供了有效的工具。
本发明涉及一种海洋来源的内切型硫酸软骨素硫酸酯酶及其编码基因与应用。所述内切型硫酸软骨素硫酸酯酶PB_3262分离自发光杆菌(Photobacterium sp.)QA16，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中的硫酸软骨素硫酸酯酶PB_3262降解富含A unit的CS‑A底物时表现为内切酶降解模式，其独特的酶学特性可应用于特殊硫酸化程度的硫酸软骨素的定向修饰，亦可制备不同的硫酸化程度的硫酸软骨素寡糖，尤其是对A unit二糖降解活力极高，酶活力达到了165.75U/mg。
本发明涉及一种海洋来源的外切型硫酸软骨素硫酸酯酶及其编码基因与应用。所述外切型硫酸软骨素硫酸酯酶PB_3285分离自发光杆菌(Photobacterium sp.)QA16，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中的硫酸软骨素硫酸酯酶PB_3285降解富含C unit的CS二糖及寡糖底物时表现为外切酶降解模式，且专一性地作用于底物的还原端。PB_3285作用底物的硫酸化模式广泛，对C unit、D unit和E unit二糖的降解活力分别为3.64、0.15、0.59mU/mg。
