本发明公开了一种耐热植酸酶突变体及其应用，属于酶工程领域。通过随机突变的方法对来源于大肠杆菌Escherichia coli植酸酶基因appA进行改造，多轮筛选得到一种突变体蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:3。本发明筛选得到的植酸酶突变体appA‑M最适pH为4.5，最适温度为65℃，在90℃处理10min后保留30％的酶活。与野生酶相比，植酸酶突变体appA‑M的热稳定性得到显著提高。所述植酸酶突变体可以广泛应用于猪禽饲料中，从而有利于减少饲料制粒过程中酶活力的损失，降低饲料成本，同时还能降低磷排放对环境的污染。
本发明提供了一种水解酶及其在生物催化合成4"‑甲氨基‑5′‑羟基‑阿维菌素中的应用，所述水解酶的氨基酸序列选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7所示中的一条。本发明筛选出的水解酶，可将甲维盐合成过程中的脱保护反应用生物催化方法取代。以5‑O‑甲酸烯丙酯基‑4"‑甲氨基‑‑阿维菌素为底物，利用酯酶的水解作用，得到产物4"‑甲氨基‑5′‑羟基‑阿维菌素，可避免复杂的化学合成过程，为生物法合成产物4"‑甲氨基‑5′‑羟基‑阿维菌素提供了一条新的途径。
本发明公开了一种基于分子对接的3’,5’‑二磷酸腺苷的高特异性的偶联酶YND突变体，所述YND突变体的基因序列为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4，所述YND突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。本发明以晶体结构已知的酵母3’,5’‑二磷酸腺苷酶为出发点设计并改造了一种PAP特异性强的偶联酶。本发明改造的酶由大肠杆菌表达系统诱导表达，储存于储存液中，‑80℃条件下，能维持活性3个月，用相应的缓冲体系稀释使用，方便且可更换反应体系，解决了体系缓冲物质对ST活性检测局限性的问题。
本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种提高植酸酶热稳定性的方法及融合植酸酶。所述融合植酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明主要是通过将野生型植酸酶Y4与肽标签SpyTag/SpyCatcher进行融合表达，从而获得所述环化融合蛋白Y4‑Spy，实现提高植酸酶热稳定性的目的。引入肽标签SpyTag/SpyCatcher后显著提高了植酸酶Y4的热稳定性。本发明提供了一种热稳定性提高的适合于在能源、食品和饲料等领域中应用的融合植酸酶，有着非常广阔的应用前景。
本发明公开了一种热稳定性提高的玉米赤霉烯酮降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的玉米赤霉烯酮降解酶为亲本酶，将第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成亮氨酸Leu，得到双突变体H134L/S136L。H134L/S136L在53℃保温2min后残余酶活提高了45％；保温5min后的残余酶活分别提高了38％；保温7min后残余酶活提高了38％。在58℃保温2min后残余酶活提高了41％，保温5min后的残余酶活提高了32％。这一发现对于制备高热稳定性的工业化玉米赤酶烯酮降解酶具有重要的应用价值。
