本发明提供了一种水解酶及其在生物催化合成4"‑甲氨基‑5′‑羟基‑阿维菌素中的应用,所述水解酶的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7所示中的一条。本发明筛选出的水解酶,可将甲维盐合成过程中的脱保护反应用生物催化方法取代。以5‑O‑甲酸烯丙酯基‑4"‑甲氨基‑‑阿维菌素为底物,利用酯酶的水解作用,得到产物4"‑甲氨基‑5′‑羟基‑阿维菌素,可避免复杂的化学合成过程,为生物法合成产物4"‑甲氨基‑5′‑羟基‑阿维菌素提供了一条新的途径。