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[发明专利]一种聚乙二醇非共价结合的左旋门冬酰胺酶及制备方法-CN202310923855.0在审
发明人：张弨 -专利权人：修正生物医药（杭州）研究院有限公司
申请日： 2023-07-26 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种聚乙二醇非共价结合的左旋门冬酰胺酶及制备方法。本发明的聚乙二醇非共价结合的左旋门冬酰胺酶，聚乙二醇作为左旋门冬酰胺酶的修饰剂，所述聚乙二醇修饰剂为直链型或分支型且末端带有氨基的单烷氧基聚乙二醇；所述聚乙二醇修饰剂平均分子量为2kDa‑6kDa。本发明提供了一种新的技术方案，使得本发明的聚乙二醇修饰的左旋门冬酰胺酶相较于现有的聚乙二醇修饰的左旋门冬酰胺酶，活性保持率高的同时，工艺更简单，产品回收率高，解决了现有技术存在的技术问题。
一种聚乙二醇共价结合左旋门冬酰胺酶制备方法

[发明专利]重组L-门冬酰胺酶及其制备方法和用途-CN201810744033.5有效
发明人：华子春;徐珊珊 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司
申请日： 2018-07-06 - 公布日： 2023-10-17 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明涉及生物制药、生物化学和药物的适应症领域，具体涉及重组L‑门冬酰胺酶(重组L‑asp)的制备方法和在制备抗白血病药物中的应用。本发明利用改良的脉冲稀释法纯化的L‑门冬酰胺酶纯度为90.14％，产率为5.23mg/L，酶的比活性为201.21IU/mg。细胞水平的活性显示：作用48h后，L‑门冬酰胺酶对Jurkat和Raji细胞的IC50分别为4.15IU/mL和4.65IU/mL；作用72h后，L‑asp对Jurkat和Raji细胞的IC50分别为2.40IU/mL和2.01IU/mL。基于以上结果，本发明提供了一种高效的重组L‑asp的制备方法并且也提供了重组L‑asp在制备抗急性白血病药物中的应用。
重组门冬酰胺酶及其制备方法用途

[发明专利]一种高纯度门冬酰胺酶的制备方法-CN201910141567.3有效
发明人：刘衍伟;王宏伟;张棋;赵亮亮;尹傲秋 -专利权人：江苏恒瑞医药股份有限公司
申请日： 2019-02-26 - 公布日： 2023-03-10 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明提供了一种高纯度门冬酰胺酶的制备方法。具体而言，该方法包括门冬酰胺酶溶液经阴离子层析柱、阳离子层析柱纯化的步骤，所得门冬酰胺酶纯度在99％以上，每1单位门冬酰胺酶中含内毒素的量小于0.015EU。本发明所述的制备工艺操作简单，回收率高，成本低，工艺衔接性好，适合工业化生产。
一种纯度门冬酰胺酶制备方法

[发明专利]一种天冬酰胺酶突变体及其基因、工程菌和制备方法-CN202110915041.3有效
发明人：刘逸寒;康宏伟;王凤华;路福平 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2021-08-10 - 公布日： 2022-08-30 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明属于酶的基因工程技术领域，具体涉及一种酶活力提高的L‑天冬酰胺酶突变体及其制备。本发明通过分子生物学技术手段获得蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)野生型的L‑天冬酰胺酶基因，利用易错PCR技术对野生型L‑天冬酰胺酶基因进行随机突变，得到L‑天冬酰胺酶突变体Y55S/I203V、H8R/Y55S/I203V，及其编码基因asnm1、asnm2，重新构建重组质粒，并实现了其在枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌中的高效表达，通过发酵、提取等技术获得高活力的L‑天冬酰胺酶。
一种天冬酰胺酶突变体及其基因工程制备方法

[发明专利]L-天冬酰胺酶SaLA及其编码基因和应用-CN202110659819.9有效
发明人：刘建国;李静;王淼;李子一;辛文;谭雯斐;徐莹莹;姜雪姣 -专利权人：中国石油大学（华东）
申请日： 2021-06-11 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明公开了L‑天冬酰胺酶SaLA及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种L‑天冬酰胺酶，命名为SaLA蛋白，是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明还保护SaLA蛋白作为L‑天冬酰胺酶的应用。本发明对于相关医疗领域、食品加工领域等，具有重大的应用前景。
天冬酰胺酶 sala 及其编码基因应用

[发明专利]一种L-天冬酰胺酶突变体及其在枯草芽孢杆菌中的表达-CN202110203167.8有效
发明人：饶志明;张显;朱曼迟;王志;杨套伟;徐美娟;邵明龙 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-02-23 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其在枯草芽孢杆菌中的表达，属于酶工程和微生物工程技术领域。采用本发明公开的米黑根毛霉来源的L‑天冬酰胺酶突变体A344E在45℃、pH7.0的条件下酶活为786.8U/mg，为野生酶509.1U/mg的1.5倍；并且本发明的L‑天冬酰胺酶突变体可以实现在枯草芽孢杆菌中高效表达，采用本发明提供的方法，可以得到是一种表达的L‑天冬酰胺酶突变体酶活为原始菌株7.1倍的重组枯草芽孢杆菌，拓宽其在食品领域的应用范围，使L‑天冬酰胺酶能大规模应用于生产中。
一种天冬酰胺酶突变体及其枯草芽孢杆菌中的表达

[发明专利]一种酶突变体-CN201910698230.2有效
发明人：刘松;陈坚;堵国成;赵伟欣 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-03-07 - 公布日： 2021-11-16 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种酶突变体，属于基因工程技术领域。此方法基于以SAPs为基础构建的功能性多肽文库，整个获得酶突变体的过程快速、高效、便捷；同时，本发明得到的酶突变体，相较于野生型碱性果胶酶，碱性果胶酶的融合酶突变体的胞外酶活最高提高了15.32倍，稳定性最高提高了3.86倍，比酶活最高提高了2.55倍；脂肪氧合酶融合酶突变体胞内酶活最高提高了2.49倍，稳定性最高提高了3.13倍，比酶活最高提高了0.9倍；天冬酰胺酶融合酶突变体胞外酶活最高提高了2.25倍，稳定性最高提高了3.56倍，比酶活最高提高了1.34倍。
一种突变体

[发明专利]一种戈登分枝杆菌L-天冬酰胺酶的制备方法与应用-CN202011630052.9在审
发明人：吕凤霞;池慧兵;陆兆新;张充;别小妹;赵海珍;周立邦;陈美容;焦琳舒 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-04-30 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明涉及一种戈登分枝杆菌L‑天冬酰胺酶的制备方法与应用。本发明公开的L‑天冬酰胺酶基因来源于戈登分枝杆菌（Mycobacterium gordonae），其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该重组L‑天冬酰胺酶具有良好的催化活力、pH范围广泛、无谷氨酰胺酶活性，有效抑制了油炸食品中丙烯酰胺的生成，可从根源上控制含淀粉类食品高温加工中潜在致癌物质丙烯酰胺的产生，在食品加工领域具有广阔的应用潜能。
一种分枝杆菌天冬酰胺酶制备方法应用

[发明专利]一种发酵法制备门冬酰胺酶的方法-CN201911368749.0有效
发明人：李少龙;丁财君;蒋驰洲;高原;黄文辉 -专利权人：常州千红生化制药股份有限公司
申请日： 2019-12-26 - 公布日： 2021-04-16 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明涉及一种发酵法制备门冬酰胺酶的方法，包括：(1)种子菌斜面培养；(2)摇瓶培养：将(1)中已长好的斜面菌种接入摇瓶内，振荡培养；(3)种子罐培养：将(2)中已培养好的摇瓶菌种接入种子罐中，在通气条件下搅拌培养；(4)发酵罐培养：将(3)中培养好的种子罐菌种移入发酵罐，接种量为5％‑10％，在通气状态下搅拌培养，然后离心，收集菌体，即得门冬酰胺酶(埃希)菌体；所述发酵罐培养基、种子罐培养基和摇瓶培养基的组分均为：玉米浆、蛋白胨、谷氨酸钠。本发明中门冬酰胺酶表达量大，效价高，并且培养基中没有TSE/BSE风险因子，使得门冬酰胺酶的应用性更好，更加符合法规要求，原料药的成本也可大大降低。
一种发酵法制备门冬酰胺酶方法

[发明专利]一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法-CN201811384656.2有效
发明人：徐书琴;张恒维;席毓淋;张显;饶志明;杨套伟;徐美娟 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-11-20 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明在天然L‑天冬酰胺酶的基础上，通过定点突变生物技术改造L‑天冬酰胺酶分子结构，L‑天冬酰胺酶突变体的纯酶液酶活提高至2037.13U/mg，较原始酶酶活(约1483.81U/mg)相比提高了约37.3％。本发明表明第22位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的在食品行业中的应用潜力。
一种提高天冬酰胺酶突变体及其构建方法

[发明专利]天冬酰胺酶活性多肽、表达盒、表达载体、宿主细胞、组合物、方法、癌症预防或治疗用途-CN201980016701.5在审
发明人： T·D·A·C·B·德索萨;N·I·T·赞基;S·B·德莫雷斯 -专利权人：奥斯瓦道·克鲁兹基金会
申请日： 2019-01-18 - 公布日： 2020-11-13 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明涉及具有天冬酰胺酶活性的多肽，与人野生L‑天冬酰胺酶(ASRGL1)相比，其自体加工速率提高，在称为HGG环的HSRGL1富甘氨酸环(组氨酸8‑甘氨酸9‑甘氨酸10)中具有突变。本文还描述了编码本发明多肽的多核苷酸，包含所述多核苷酸的表达盒、表达载体、宿主细胞、药物组合物、本发明多肽在制造预防药物或癌症治疗中的用途、生产本发明多肽的方法以及预防或治疗癌症的方法。
天冬酰胺酶活性多肽表达载体宿主细胞组合方法癌症预防治疗用途

[发明专利]一种L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法-CN201711328978.0有效
发明人：张显;饶志明;李谞;杨套伟;徐美娟;张恒维;赵浩东;刘鹏 -专利权人：江南大学
申请日： 2017-12-13 - 公布日： 2020-10-09 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程、酶工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的核苷酸的基础上，将其编码的第298位赖氨酸突变成亮氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白，得到的突变体最适温度从95℃降低到85℃，最适pH从8降低到7，Km值从6.5降低到4.9，比酶活突变前后无变化。本发明表明298位赖氨酸残基对酶底物亲和性有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
一种天冬酰胺酶突变体及其构建方法

[发明专利]一种嗜热L-天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法-CN201711354028.5有效
发明人：饶志明;李谞;张显;徐书琴;胡静宜;徐美娟;杨套伟 -专利权人：江南大学
申请日： 2017-12-15 - 公布日： 2020-08-04 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法，属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中，以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板，以易错PCR技术构建突变文库，并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法，筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基，构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A，其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段，提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵，L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
一种天冬酰胺酶突变体及其筛选发酵方法

[发明专利]一种类芽孢杆菌L-天冬酰胺酶及其编码基因和应用-CN201610892344.7有效
发明人：江正强;杨绍青;史然;刘瑜;穆青 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2016-10-12 - 公布日： 2020-06-02 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明涉及一种类芽孢杆菌L‑天冬酰胺酶及其编码基因与应用。该L‑天冬酰胺酶为类芽孢杆菌来源的Rhizobium etli型L‑天冬酰胺酶，具体为序列表序列2或4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明提供的蛋白质作为L‑天冬酰胺酶具有如下酶学性质：比酶活力为35.2U mg‑1，最适反应pH为8.5，在pH 5.5‑10.0范围内稳定；最适反应温度为45℃，且在55℃以内稳定，且具有较好的热稳定性。将该蛋白质应用于薯片和月饼中，使最终产品中丙烯酰胺的含量分别显著降低了86％和52％。利用本发明提供的蛋白质可有效减少焙烤食品中的丙烯酰胺含量，保证此类食品的安全，具有重要的社会意义和经济效益。本发明提供的蛋白质还可满足食品、医药等工业应用中对L‑天冬酰胺酶的反应pH和热稳定性的特殊要求，具有较大应用潜力。
种类芽孢杆菌天冬酰胺酶及其编码基因应用

[发明专利]一株嗜热L-天冬酰胺酶在高温油炸食品中的应用-CN201711354014.3有效
发明人：饶志明;李谞;张显;杨套伟;徐美娟;杨嘉禾 -专利权人：江南大学
申请日： 2017-12-15 - 公布日： 2020-03-06 - 主分类号： C12N9/82 文献下载
摘要：本发明公开了一株嗜热L‑天冬酰胺酶在高温油炸食品中的应用，属于酶工程领域和食品应用领域。本发明酶为SEQIDN0.1所示的氨基酸序列，将其应用到炸薯条之中。本发明将薯条浸没于嗜热L‑天冬酰胺酶突变株的酶溶液中，在85℃下处理5分钟,降低了样品中丙烯酰胺含量76％。该发明展现了该L‑天冬酰胺酶突变株在油炸食品工业中应用的潜能。
一株嗜热天冬酰胺酶高温油炸食品中的应用

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