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[发明专利]一种慢病毒转染助转剂及其应用-CN202211023688.6有效
发明人：谢海涛;方晓;马丽雅 -专利权人：深圳市先康达生命科学有限公司
申请日： 2022-08-25 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种慢病毒转染助转剂及其应用；该助转剂包括含浓度为1mg/ml~50mg/ml碱性氨基酸的无血清培养基。这种转染助转剂，可有效中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥，促进吸附作用，使慢病毒容易进入免疫细胞中，从而有效提高嵌合抗原受体的表达，如CAR‑T细胞的阳性率，且这种助转剂没有细胞毒性，且采用该助转剂的慢病毒转染工艺，操作简单，转染完成后，无需进行去除残留操作，使得转染工艺操作更简单、方便。
一种病毒转染助转剂及其应用

[发明专利]一种滋养细胞、其制备方法及其在大量快速扩增γδT细胞中的应用-CN202010109119.8有效
发明人：张云龙 -专利权人：秦皇岛中邦干细胞医学科技有限公司
申请日： 2020-02-21 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种滋养细胞、其制备方法及其在大量快速扩增γδT细胞中的应用，该制备方法包括：S1，pLenti‑okt3‑CD64‑CD86‑4.1BBL慢病毒质粒载体的构建；S2，用pLenti‑okt3‑CD64‑CD86‑4.1BBL质粒载体包装慢病毒颗粒；S3，K562‑okt3‑CD64‑CD86‑4.1BBL滋养细胞的制备；S4，获取脐血的白膜层细胞；S5，脐血γδT细胞的体外扩增。本发明的制备方法利用okt3单链抗体通过CD8A跨膜区表达在滋养细胞膜上，尤其是能从脐血中低成本、快速、大量扩增γδT细胞，经过一个24天的扩增周期，γδT细胞的扩增倍数能达到10000倍左右，制备的γδT细胞纯度能达到90％以上。相较于用可溶的okt3抗体刺激，膜结合的okt3对γδT细胞扩增倍数在其2倍以上，具有良好的临床应用前景。
一种滋养细胞制备方法及其大量快速扩增中的应用

[发明专利]一种假型化病毒载体颗粒-CN202110527705.9在审
发明人：刘翔;杨艳梅;云小玲;赵威 -专利权人：上海恒润达生生物科技有限公司
申请日： 2021-05-14 - 公布日： 2022-11-15 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及包膜糖蛋白突变体以及包膜糖蛋白突变体制备慢病毒并提高病毒产量和滴度,涉及用于将生物材料转移到细胞中的假型化病毒载体颗粒，其中所述载体颗粒至少包含：嵌合包膜糖蛋白，其包含或由长臂猿白血病病毒(GalV)包膜糖蛋白的跨膜和胞外结构域与鼠白血病病毒(MLV)包膜糖蛋白的胞质尾结构域的融合体组成,其中胞质尾结构域缺乏融合抑制性R肽；或修饰的GalV包膜糖蛋白，其中胞质尾结构域缺乏融合抑制性R肽。
一种假型化病毒载体颗粒

[发明专利]EHBP1L1基因抑制剂作为人乳腺癌治疗药物的应用-CN202110786509.3有效
发明人：李萍;谢小兵;张贞;胡燕;苏敏 -专利权人：湖南中医药大学第一附属医院（（中医临床研究所））
申请日： 2021-07-12 - 公布日： 2022-11-15 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供EHBP1L1基因抑制剂作为人乳腺癌治疗药物的应用，用于治疗人乳腺癌药物的分子靶点选择及EHBP1L1基因作为细胞增殖、转移、侵袭的阻断靶点功能基础。该基因功能明确，适于推广应用。
ehbp1l1 基因抑制剂为人乳腺癌治疗药物应用

[发明专利]慢病毒载体的制备方法及得到的慢病毒载体和应用-CN202011173482.2有效
发明人：杨兴林;杨佳丽;詹霞;贾国栋;由庆睿 -专利权人：和元生物技术（上海）股份有限公司
申请日： 2020-10-28 - 公布日： 2022-11-15 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明属于生物领域，尤其涉及慢病毒载体的制备方法及得到的慢病毒载体和应用。本发明公开了一种慢病毒载体的制备方法，包括：以基于LTR1.27‑GEW质粒为骨架，在5’端添加R和U5区，得到慢病毒载体Obio‑01。本发明制备得到的新型的第四代慢病毒载体在保障安全性的前提下，还能够具有高产量的病毒滴度，可应用于基因治疗等领域。
病毒载体制备方法得到应用

[发明专利]间充质干细胞及其抗炎应用-CN202210213646.2有效
发明人：秦大江;徐洪杰;吴迪;岑晓彤;凌奕霞 -专利权人：生物岛实验室
申请日： 2022-03-03 - 公布日： 2022-11-15 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供了利用重组间充质干细胞治疗炎性疾病的方法，所述重组间充质干细胞包含过表达多个细胞因子的慢病毒载体，所述炎性疾病选自胸膜炎、阴道炎和骨关节炎中的一种或多种。本发明还涉及包含所述慢病毒载体的宿主细胞，以及所述慢病毒载体和包含所述慢病毒载体的宿主细胞在制备用于治疗胸膜炎、阴道炎和骨关节炎的药物中的应用。
间充质干细胞及其应用

[发明专利]一种慢病毒保存液-CN202210718505.6在审
发明人：刘奇;田烁 -专利权人：广州达博生物制品有限公司
申请日： 2022-06-23 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供了一种慢病毒保存液，属于生物技术领域。本发明所述的慢病毒保存液包括HEPES(4‑羟乙基哌嗪乙磺酸)、sucrose(蔗糖)、NaCl以及MgCl2，采用本发明所述的慢病毒保存液，可以长期、稳定地保存慢病毒载体，维持慢病毒载体的生物学活性；还可以在使用过程中反复冻融，对于细胞治疗领域具有广阔的应用前景和应用价值。
一种病毒保存

[发明专利]一种高效的小鼠骨髓来源巨噬细胞的转染方法及其应用-CN201811233196.3有效
发明人：沈萍萍;章文龙;唐嘉荩;黄亚红 -专利权人：南京大学
申请日： 2018-10-17 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明为一种高效的小鼠骨髓来源巨噬细胞的转染方法及其应用，其包括以下步骤：1)首先将293T细胞传代至60mm*15mm皿中，培养过夜，使其密度达到80％，按照目的质粒/psPAX2/pMD2.G的顺序以6/3/1的比例进行慢病毒的包装，以获得高滴度慢病毒，滴度为2～3×107TU/mL(总体积5mL)；2)取小鼠骨髓，加入鼠源M‑CSF(10ng/mL)进行巨噬细胞诱导，在诱导的第二天加入慢病毒，可以获得高转染效率。本发明在巨噬细胞诱导过程中加入慢病毒，不但能够提高了慢病毒的转染效率，同时还能在不影响巨噬细胞得率的情况下，缩短实验时间。
一种高效小鼠骨髓来源巨噬细胞转染方法及其应用

[发明专利]过表达SHP2的基因工程化间充质干细胞外囊泡的制备方法和应用-CN202211064603.9在审
发明人：汪超;许方 -专利权人：苏州大学
申请日： 2022-09-01 - 公布日： 2022-11-08 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种过表达SHP2的基因工程化间充质干细胞外囊泡的制备方法和应用，将MSC在减血清低糖DMEM培养基中培养，采用编码PTPN11基因的慢病毒转染MSC，得到MSC‑SHP2，转入无外泌体的血清低糖DMEM培养基中培养，收集上清，通过超滤法进行粗提，再通过亲和层析法进一步提取，能够收集到稳定表达SHP2的间充质干细胞外囊泡。本发明的工程化间充质干细胞外囊泡制备工艺简单成熟，生物相容性好，可作为一种新型治疗制剂，具有重要的研究价值和广阔的应用前景。
表达 shp2 基因工程化间充质干细胞外囊泡制备方法应用

[发明专利]一种基因编辑工程化M1型巨噬细胞外泌体的制备方法及其应用-CN202210858313.5在审
发明人：梅林;王莹;余永康 -专利权人：中山大学
申请日： 2022-07-20 - 公布日： 2022-11-01 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种基因编辑工程化M1型巨噬细胞外泌体及其制备方法与应用。本发明利用外泌体参与细胞间的通讯及OX40/OX40L通路在机体免疫激活中的重要作用，获得过表达OX40L蛋白的工程化M1型巨噬细胞外泌体；该外泌体能重新编程M2型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞，其效果比原始的M1型巨噬细胞外泌体更加显著；能激活CD8+T细胞，其分泌的IFN‑γ一方面可以杀伤肿瘤细胞，另一方面可以作用于肿瘤相关巨噬细胞，从而实现适应性免疫和先天免疫的协同抗肿瘤作用，从而显著抑制肿瘤的生长、有效地延长小鼠的生存期。同时，工程化M1型巨噬细胞外泌体的体内生物安全性好，参与细胞间的通信，调节机体的免疫。
一种基因编辑工程 m1 巨噬细胞外泌体制备方法及其应用

[发明专利]慢病毒包装系统、其所制得的慢病毒及经该慢病毒转导的细胞及其应用-CN202110465505.5在审
发明人：林韦齐;周思妤;杨曜诚;林建廷;林成龙 -专利权人：沛尔生技医药股份有限公司
申请日： 2021-04-28 - 公布日： 2022-10-28 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供一种慢病毒包装系统、其所制得的慢病毒及经该慢病毒转导的细胞及其应用。慢病毒包装系统包含：转移质粒，其包含TAR嵌合5’LTR的核苷酸序列；至少一包装质粒，包含编码TAR RNA结合蛋白的基因的核苷酸序列、rev基因的核苷酸序列、gag基因的核苷酸序列及pol基因的核苷酸序列；及包膜质粒。本发明因包含上开质粒而可表达TAR RNA结合蛋白的基因，使所生产的慢病毒有较高的病毒效价，且将所生产的慢病毒用于细胞转导时亦能提升转导率及基因传递效率。本发明另提供一种提高宿主细胞的慢病毒产量的方法，其包含使用前述的慢病毒包装系统转染所述宿主细胞，并能进一步降低制造基因改造细胞的成本。
病毒包装系统转导细胞及其应用

[发明专利]一种BDNF基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法-CN202210955612.0在审
发明人：王金梅;张坤山;范国平;曾维鸣;王云娟 -专利权人：江苏艾尔康生物医药科技有限公司
申请日： 2022-08-10 - 公布日： 2022-10-21 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种BDNF基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法，属于细胞治疗领域。本发明通过以下步骤制得：首先将人的BDNF基因克隆到慢病毒载体上，与脐带间充质干细胞混合培养得到BDNF基因修饰的脐带间充质干细胞，并通过嘌呤霉素进行抗性筛选。经修饰的间充质干细胞能显著改善动物模型的疾病相关指标，且未引发免疫原性反应，对于治疗视网膜色素变性及其他光感受器退行性病变具有重大的临床治疗价值。
一种 bdnf 基因修饰脐带间充质干细胞及其制备方法

[发明专利]一种用于敲除猪免疫球蛋白重链IGHG区的gRNA及其应用-CN202111037414.8有效
发明人：林艳丽;王友亮;吴晓洁;邢鹏程;崔雨萌;李响 -专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
申请日： 2021-09-06 - 公布日： 2022-10-21 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于敲除猪免疫球蛋白重链IGHG区的gRNA及其应用。本发明所要保护的一个技术方案是敲除猪免疫球蛋白重链IGHG区的方法，所述方法包括向猪细胞中导入降低或抑制猪免疫球蛋白重链恒定区的IGHG区的蛋白质活性或含量的物质或调控所述蛋白质编码基因表达的物质。本发明利用猪免疫球蛋白重链IGHG区重复序列多的特点，通过使用序列表中序列2所示的4个gRNA联用核酸分子的CRISPR‑Cas9技术实现所述IGHG区多个位点多重切割，最终实现了猪中免疫球蛋白重链恒定区影响抗体免疫原性的IGHG区长达110kb序列的同时敲除，为建立人源免疫球蛋白转基因猪奠定基础。
一种用于免疫球蛋白 ighg grna 及其应用

[发明专利]一种CAR-T载体及其制备方法与应用-CN202210515815.8在审
发明人：田晓丽 -专利权人：上海怡豪生物科技有限公司
申请日： 2022-05-11 - 公布日： 2022-10-18 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种CAR‑T载体及其制备方法与应用。一种通过干扰A2AR基因降低肿瘤免疫抑制的靶向MSLN的CAR‑T载体，所述CAR‑T载体包括A2AR干扰元件、嵌合抗原受体和载体框架，所述嵌合抗原受体连接在所述CAR‑T载体上，所述嵌合抗原受体包括MSLN单链抗体一种特异性结构，所述MSLN单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；所述A2AR干扰元件包括U6启动子和A2AR shRNA。本发明针对治疗载体的CAR结构包括MSLN单链抗体结构；该结构表达的Anti‑MSLN特异性蛋白负责识别TAA，进而引导T细胞靶向性杀伤肿瘤细胞；此外，A2AR干扰元件可抑制CAR‑T细胞中A2AR的表达，降低肿瘤免疫逃逸，增强T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。实验结果显示，本发明提供的CAR‑T载体对HCT116细胞和SKOV3细胞具有较好杀伤作用。
一种 car 载体及其制备方法应用

[发明专利]抗原结合域自动优化的嵌合抗原受体修饰细胞文库的构建、筛选方法及其应用-CN202110383729.1在审
发明人：牛志远;朱武凌;郭长江;支灵通 -专利权人：新乡医学院
申请日： 2021-04-09 - 公布日： 2022-10-18 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗原结合域自动优化的嵌合抗原受体修饰细胞文库的构建、筛选方法及其应用，该方法通过在细胞中插入一段嵌合抗原受体序列，并通过顺式作用元件及反式作用因子在胞外抗原结合域不断诱导突变产生，建立一个可供后续筛选的抗体序列动态库；抗体序列动态库被受体2展示在细胞表面，形成嵌合受体库细胞文库；受体1能够识别靶标抗原上的标签，并与能够识别靶标抗原的受体2形成二聚体，从而启动筛选基因的表达，并同时启动抑制系统来维持抗原结合域的稳定。筛选嵌合抗原受体文库，将筛得的阳性细胞嵌合受体的抗原结合域进行扩增测序，即可得到抗原识别区的核酸序列。此方法可用于多种抗体制备，更为简便高效。
抗原结合自动优化嵌合受体修饰细胞文库构建筛选方法及其应用