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[发明专利]一种辅助带有CAR的慢病毒转染原代NK细胞的试剂盒及其应用-CN202210033119.3有效
发明人：曾皓宇;沈振波;蒋碧愉;卫佳琦;杜越 -专利权人：广东普罗凯融生物医药科技有限公司
申请日： 2022-01-12 - 公布日： 2023-01-06 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供一种辅助带有CAR的慢病毒转染原代NK细胞的试剂盒及其应用。该试剂盒包括第一助感染剂、第二助感染剂、第三助感染剂、第四助感染剂；第一助感染剂为：聚凝胺终浓度为8～100mg/mL的水溶液；第二助感染剂为：白介素‑2终浓度为500000～5000000U/mL、溶剂为0.3～0.7vol％人血清白蛋白的溶液；第三助感染剂为：白介素‑12终浓度为20000～200000U/mL、溶剂为0.3～0.7vol％人血清白蛋白的溶液；第四助感染剂为：植物血凝素终浓度为1～20mg/mL的水溶液。将该试剂盒应用于CAR‑NK细胞的制备中，同时通过控制加入慢病毒载体的时间点、助感染剂的用量，并在第一次加入助感染剂后进行离心处理，能够有效提高NK细胞的转染效率。
一种辅助带有 car 病毒转染 nk 细胞试剂盒及其应用

[发明专利]一种治疗2型糖尿病的间充质干细胞的制备方法-CN202211236592.8在审
发明人：马宜冬;王苗苗;李纬国 -专利权人：上海君益禾生物医学科技有限公司
申请日： 2022-10-10 - 公布日： 2023-01-03 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种治疗2型糖尿病的间充质干细胞的制备方法，涉及生物技术领域，包括以下步骤：分离人脐带间充质干细胞；慢病毒基因修饰P1代间充质干细胞；传代、筛选和冻存基因修饰的间充质干细胞；复苏、扩增基因修饰的间充质干细胞间充质干细胞；基因修饰的间充质干细胞与胰岛β细胞共培养；2型糖尿病模型小鼠尾静脉回输基因修饰的间充质干细胞。上述方法制备的基因修饰的间充质干细胞解决了传统的间充质干细胞治疗2型糖尿病效果不明显、机制不清晰等问题，能够有效恢复2型糖尿病人群的胰岛功能。
一种治疗糖尿病间充质干细胞制备方法

[发明专利]特异性高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA-MB-231细胞株及构建方法-CN201711336611.3有效
发明人：朴海龙;刘晓龙;李同明 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2017-12-14 - 公布日： 2023-01-03 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种敲除野生型MTDH后重新高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA‑MB‑231细胞株及其构建方法。利用CRIPR/Cas9系统将乳腺癌细胞系MDA‑MB‑231中内源表达的MTDH进行敲除，之后通过定点突变的方式构建MTDH中棕榈酰化位点和sgRNA识别序列处Protospacer Adjacent Motif(PAM)位点同时突变的MTDH表达载体，借助慢病毒体系和抗性筛选获得特异性高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA‑MB‑231细胞株。经测序和Western Blot检测细胞株中MTDH突变及高表达，最终成功构建内源MTDH敲除而棕榈酰化缺失MTDH特异性高表达的细胞株，可作为研究MTDH棕榈酰化修饰在乳腺癌发生发展中的分子作用机制及所参与代谢调控过程的理想细胞株。
特异性表达棕榈缺失 mtdh mda mb 231 细胞株构建方法

[发明专利]一种改良型慢病毒表达载体及其构建方法与应用-CN202180034496.2在审
发明人：邹江波;方海宇 -专利权人：南京金斯瑞生物科技有限公司
申请日： 2021-05-13 - 公布日： 2022-12-30 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：提供了一种慢病毒表达载体及其构建方法与应用，所述慢病毒表达载体的质粒骨架以PLVX‑Puro为基础，通过如下步骤改造完成：a.在5'LTR上游通过基因合成和亚克隆的方式加入CMV增强子和启动子；b.将原来的5'LTR更换成长度为181bps的新5'LTR(SEQ ID NO：3)；c.将原来载体上的CMV启动子更换成EFS启动子；d.将原来载体多克隆位点后面的PGK启动子删除，同时引入P2A连接子序列；e.将原来的Puro抗性更换成更短的Blasticidin抗性；f.将原来的3'LTR更换成部分删除U3的LTR(SEQ IDNO：7)。改造获得的慢病毒表达载体相比于PLVX‑Puro具有更高的包装容量。
一种改良病毒表达载体及其构建方法应用

[发明专利]一种间充质干细胞条件性永生化方法-CN202211257180.2在审
发明人：刘佳;龙灿玲;李康;刘景艳;郭汭 -专利权人：深圳市龙岗区人民医院
申请日： 2022-10-14 - 公布日： 2022-12-30 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种间充质干细胞条件性永生化方法，涉及基因工程技术领域，其技术方案要点是：本方法通过Tet‑on系统控制永生化基因SV40LT的表达，制作条件性永生化MSCs(conditional immortalized MSCs,iMSCs)，实现细胞的增殖的在多四环素(doxycycline,Dox)的控制下的进行。当培养液中存在Dox时，永生化基因表达，细胞可以快速增殖；当培养液中去掉Dox后，永生化基因不表达，细胞逐渐停止分裂，表现出与原代MSCs相似的表面抗原谱，并保留了MSCs的分化潜能及外泌体分泌功能。
一种间充质干细胞条件永生方法

[发明专利]一种CD30 CAR慢病毒表达载体及其制备方法和应用-CN201910999876.4有效
发明人：吴旸;徐恒;张薇;陈丹;董书辰;陆雅;冯继锋;吴建中;马蓉;倪杰 -专利权人：江苏省肿瘤医院
申请日： 2019-10-21 - 公布日： 2022-12-27 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种CD30 CAR慢病毒表达载体及其制备方法和应用，所述CD30 CAR慢病毒表达载体包括CD30抗体的重链和轻链，所述CD30 scFv基因片段，其基因序列包括SEQ ID NO：1。本发明成功制备了CD30 CAR慢病毒表达载体，并证明CD30 CAR慢病毒表达载体能够用于制备抑制T细胞淋巴瘤的CAR‑T细胞药物。
一种 cd30 car 病毒表达载体及其制备方法应用

[发明专利]一种两级SynNotch逻辑调控结构及其应用-CN202211268032.0在审
发明人：谢海涛;马丽雅;都晓龙 -专利权人：深圳市先康达生命科学有限公司
申请日： 2022-10-17 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种两级SynNotch逻辑调控结构及其应用；该两级SynNotch逻辑调控结构包括靶点结合区域、Notch core区和启动调控蛋白区，且该两级SynNotch逻辑调控结构分为一级SynNotch逻辑调控结构和二级SynNotch逻辑调控结构，而二级SynNotch逻辑调控结构的表达受到一级SynNotch逻辑调控结构的调控。该发明两级SynNotch可以使免疫细胞形成浸润效果，解决了传统CAR结构的常时激活导致的免疫细胞提前耗竭问题、免疫细胞的增殖浸润问题、免疫细胞的过度杀伤及可能发生严重副反应的问题和肿瘤微环境的改善问题，极大的提高了对于肿瘤的杀伤能力及免疫细胞治疗的安全性。
一种两级 synnotch 逻辑调控结构及其应用

[发明专利]一种慢病毒高效感染人NK细胞的方法-CN202211211385.7在审
发明人：刘永峰;芦志华 -专利权人：北京奇迈永华生物科技有限公司
申请日： 2022-09-30 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明属于生物医药领域，具体是一种慢病毒高效感染人NK细胞的方法。所述方法包括使用携带目标基因的病毒对NK细胞进行两次病毒感染的步骤，第一次病毒感染时加入polybrene，第二次病毒感染时加入PMA、IONOMYCIN、polybrene、IL‑2。
一种病毒高效感染 nk 细胞方法

[发明专利]快速制备可直接使用的gRNA表达载体的方法及其应用-CN201811205040.4有效
发明人：向熙;罗永伦;李聪慧;窦红伟 -专利权人：青岛华大基因研究院
申请日： 2018-10-16 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提出了一种快速制备可直接使用的gRNA表达载体的方法及其应用。该方法包括将待连接退火gRNA和骨架载体进行连接反应，以便获得含有所述gRNA表达载体的连接产物，其中，所述连接反应的反应体系中含有：大于5ng/微升同时不大于250ng/微升的所述骨架载体，其中，所述骨架载体相对于所述待连接退火gRNA是过量的。发明人尝试扩大连接体系中骨架载体的用量，使得骨架载体相对于所述待连接退火gRNA是过量的，发明人发现，大幅提高骨架载体的用量，可以大大增加连接产物中环状gRNA表达载体的得率，缩短载体构建所用时间及成本，并且不影响基因编辑效率。
快速制备直接使用 grna 表达载体方法及其应用

[发明专利]一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用-CN202211025242.7在审
发明人：赵彬 -专利权人：赵彬
申请日： 2022-08-25 - 公布日： 2022-12-16 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，涉及滚塑技术领域，包括以下步骤：S1、原始胚胎干细胞的获取；S2、细胞转染；S3、细胞观察；S4、细胞鉴定；S5、细胞储存。该MANF基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，利用MANF基因载体使得脐带间充质干细胞转染表达为脐带间充质干细胞，该脐带间充质干细胞制备过程中经过传代培养并经由细胞鉴定将无损的细胞留置保存，使得脐带间充质干细胞活性高效用强，由于脐带间充质干细胞源自脐带兼具胚胎干细胞和成体于细胞的遗传和行为特征细胞采集不对采集者造成伤害，同时迁移到新环境下，对环境刺激更敏感适应性，因为脐带间充质干细胞具有较低的免疫，移植后不会引起宿主的免疫防御。
一种 manf 基因修饰脐带间充质干细胞制备应用

[发明专利]病毒样颗粒及其构建方法和应用-CN202111588625.0有效
发明人：刘骏;周春艳;金丽;谢伟建;昌慧鑫;肖倩 -专利权人：复百澳（苏州）生物医药科技有限公司
申请日： 2021-12-23 - 公布日： 2022-12-09 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供了一种病毒样颗粒及其构建方法和应用，属于生物医学工程领域。本发明基于二代慢病毒载体系统，提供了一种包含冠状病毒属新型冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白)的Narm和NTD区域的慢病毒载体，同时通过改造psPAX2系统质粒，获得了具有更高RNA核载量的病毒样颗粒，且无病毒基因组整合风险，可以用于核酸检测质控品的制备、疫苗制备和基因治疗药物递送。
病毒颗粒及其构建方法应用

[发明专利]肝祖细胞样细胞库的构建方法及其制备的细胞株与应用-CN202010236441.7有效
发明人：鄢和新 -专利权人：上海赛立维生物科技有限公司
申请日： 2020-03-30 - 公布日： 2022-12-06 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供了一种肝祖细胞样细胞库的构建方法，包括：对不同供体来源的人原代肝细胞培养物依次进行转化培养、冻存处理、增殖培养、第一传代处理、病毒感染、第二传代处理、连续筛选培养以及连续传代培养。本发明的所述异质性永生肝祖细胞样细胞库构建方法中，对每个供体来源的人原代肝细胞培养物在进行所述增殖培养前先进行转化培养，有利于赋予所述人原代肝细胞培养物良好的增殖性能，结合后续的培养参数控制，使得到的不同供体来源的永生肝祖细胞样细胞株具有良好的体外增殖能力。本发明还提供了所述肝祖细胞样细胞库的应用以及通过所述构建方法得到的细胞株。
细胞构建方法及其制备细胞株应用

[发明专利]一种基因工程化调节性T细胞来源的细胞外囊泡的制备方法及其应用-CN202210965005.2在审
发明人：陈江华;林锦雯 -专利权人：浙江大学医学院附属第一医院
申请日： 2022-08-12 - 公布日： 2022-11-29 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：一种基因工程化调节性T细胞来源的细胞外囊泡的制备方法及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了基因工程化调节性T细胞的制备方法以及利用该T细胞制备细胞外囊泡的制备方法以及应用。本发明提供的基因工程化调节性T细胞的制备方法能够克服现有调节性T细胞来源产量低的实际问题，通过获取来源简便且产量大的CD4+CD25‑T细胞，通过慢病毒颗粒转染，从而获得高纯度表达FOXP3基因的稳定细胞系；本发明制备及分离细胞外囊泡的方法，可分离得到蛋白污染少，活性高的囊泡浓缩液，基于体积排阻法与旋转超滤结合的方法，分离效率高，速度快，且双重方法的结合能确保分离纯度，大大降低污染，减少使用者的不良反应。
一种基因工程调节细胞来源外囊泡制备方法及其应用

[发明专利]一种诱导细胞凋亡的载体系统-CN202011426723.X有效
发明人：齐晓岚;王晓玲;何志旭;刘健;胡晓霞 -专利权人：贵州医科大学
申请日： 2020-12-09 - 公布日： 2022-11-29 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及生物医学领域，公开了一种诱导细胞凋亡的载体系统，包括Plasmid CMV‑FKBP‑tdTomato和Plasmid EF1α‑FRBCaspase8‑2A‑BSD；还公开了制备方法；还公开了载体系统的应用。本发明的载体系统制备过程简单，可通过局部导入并表达在特定部位，系统作用与病变机体方法直接，起效周期短，可缩短研究时间，标记和清除过程独立控制，实验结果更加直观，因此，本发明的载体系统可广泛应用于疾病的机制研究和治疗策略探索中，例如疾病的体内病变细胞分布研究，病变细胞与疾病的发生和治疗关系的研究。
一种诱导细胞载体系统

[发明专利]用于活化γ-δT细胞的方法和组合物-CN201780017712.6有效
发明人： C·D·保扎;李海山;T·拉胡森;刘美龄 -专利权人：美国基因技术国际有限公司
申请日： 2017-01-13 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明一般涉及用于激活γδT细胞的基因治疗和免疫疗法的方法和组合物，特别是可用于治疗各种癌症和感染性疾病。
用于活化细胞方法组合