[发明专利]一种用于检测桃拉综合征病毒的CRISPR-Cas13a等温检测引物组及应用

权利要求书

1.一种用于检测桃拉综合征病毒的CRISPR-Cas13a等温检测引物组，其特征在于，包括一个包含三条crRNA的crRNA组和一个RNA探针，三条crRNA分别命名为：TSV-crRNA3、TSV-crRNA5和TSV-crRNA7，RNA探针命名为TSV-Probe，核苷酸序列分别为：

TSV-crRNA3：GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACAGCAAATCACACTGTTCACACTTGAAGA；

TSV-crRNA5：GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACGTGGGGAGCTTAAACTGGACACACTGTG；

TSV-crRNA7：GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACTATTTTCTCGCTCAATTTCCTCACACAA；

TSV-Probe：Fam-_rU_rU_rU_rU_rU-BHQ1。

2.如权利要求1所述的CRISPR-Cas13a等温检测引物组在制备用于检测桃拉综合征病毒的试剂盒中的应用。

3.一种用于检测桃拉综合征病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的CRISPR-Cas13a等温检测引物组。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照，所述阳性对照为含有桃拉综合征病毒的RNA片段，序列如SEQ ID No.1所示。

5.一种非疾病诊断为目的的检测桃拉综合征病毒的方法，其特征在于，使用权利要求3或4所述试剂盒，所述方法包括以下步骤：

(1)待检样品RNA的提取；

(2)CRISPR等温检测反应，以步骤(1)提取的待检样品RNA作为模板，使用权利要求1所述的CRISPR-Cas13a等温检测引物组进行等温扩增反应，等温扩增反应使用等温扩增仪；

(3)结果判断：通过等温扩增仪自行分析反应中的荧光变化来判断反应扩增结果，仪器软件界面出现扩增曲线为阳性，表明待检样品含有桃拉综合征病毒；否则为阴性，表明待检样品不含桃拉综合征病毒。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)中采用动物组织RNA提取试剂盒提取样品总RNA。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中CRISPR等温检测反应时反应体系：10×Cas13a缓冲液2μL，Cas13a酶1μL，crRNA 1μL；RNase抑制剂1μL；TSV-Probe 0.5μL，模板1μL，用超纯水补齐至20μL。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中等温扩增程序为：37℃反应60min。