[发明专利]一种表达新冠病毒Spike蛋白重组副流感病毒5型制备和应用

说明书

本发明提供一种表达冠状病毒Spike蛋白的重组副流感病毒5型载体，所述重组副流感病毒5型载体包含一种副流感病毒5型基因组，所述基因组包含冠状病毒Spike蛋白突变体的编码序列；所述冠状病毒Spike蛋白突变体的编码序列不含有副黏病毒转录终止序列，且冠状病毒Spike蛋白突变体的氨基酸序列上不含有Furin蛋白酶裂解位点。结果表明，免疫重组病毒rPIV5‑SH‑Spike组小鼠体内产生抗体针对新冠病毒Spike蛋白的特异性抗体，而rPIV5对照组小鼠未能检测到针对新冠病毒Spike蛋白的特异性抗体。表明rPIV5‑SH‑Spike重组病毒免疫小鼠能够刺激小鼠产生针对Spike蛋白的特异性抗体。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种表达新冠病毒Spike蛋白重组副流感病毒 5型制备和应用。

背景技术

新冠肺炎的临床症状包括发热、干咳、乏力等，患者可出现鼻塞、流涕、咽痛、结膜炎等多种症状，重症患者可出现呼吸困难、低氧血症，严重者可发展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克等甚至导致死亡。疫苗接种是预防新冠病毒的最有效手段之一，目前各国已有多个研究机构进行新冠疫苗的制备，包括灭活疫苗，重组蛋白疫苗，重组腺病毒疫苗，mRNA疫苗以及病毒载体疫苗等。灭活疫苗可以有效地激发高水平的体液免疫，相对安全，但不能诱导细胞毒T淋巴细胞反应，不能够产生局部免疫反应；重组蛋白疫苗技术成熟，不良反应小，但生产速度较慢；重组腺病毒疫苗虽然免疫效果好，但可能会存在一定的不良反应，且人体内可能含有针对腺病毒载体的抗体，会影响疫苗效果；mRNA疫苗相对效果好，但存储运输条件相对较为苛刻，成本较高。

病毒载体疫苗具有多种优势，由于是活病毒载体，可在免疫机体内进行复制，诱导较强的免疫反应；可通过自然感染，如滴鼻、喷雾等方式进行免疫；可产生体液免疫与细胞免疫，除了激发全身免疫反应外，还可激发局部免疫反应，如在呼吸道中产生sIgA 抗体，发挥较强的免疫保护效果。目前，在新冠疫苗的研发过程中，已有多种病毒载体疫苗在研发过程中，并在动物模型中具有良好的免疫保护效果，如黄热病毒、痘病毒、新城疫病毒、水疱口炎病毒等。副流感病毒5型(PIV5)作为预防犬窝咳的疫苗在犬中应用已有数十年的历史，而且未被证实可引起任何其他动物包括人致病。

发明内容

本发明提供一种表达冠状病毒Spike蛋白的重组副流感病毒5型载体，所述重组副流感病毒5型载体包含一种副流感病毒5型基因组，所述基因组包含冠状病毒Spike蛋白突变体的编码序列；所述冠状病毒Spike蛋白突变体的编码序列不含有副黏病毒转录终止序列，且冠状病毒Spike蛋白突变体的氨基酸序列上不含有Furin蛋白酶裂解位点 (RRAR)。

可选的，所述冠状病毒为2019-nCoV。

可选的，所述副流感病毒5型基因组为：用序列甲替换一种副流感病毒5型基因组的小疏水蛋白基因核苷酸序列，所得；

所述序列甲为如下1)或2)或3)：

A)SEQ ID NO：1所示核苷酸序列第927位核苷酸由A突变为G、第3216位核苷酸由A突变为G、第2106位核苷酸由A突变为G，且第2044位至2055位替换为 GCA，得到的DNA分子；

B)在严格条件下与A)限定的DNA分子杂交且编码所述冠状病毒Spike蛋白突变体的DNA序列，冠状病毒Spike蛋白突变体的氨基酸序列上不含有Furin蛋白酶裂解位点(RRAR)，所述冠状病毒Spike蛋白突变体的编码序列不含有副黏病毒转录终止序列；

C)与A)或B)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且编码所述冠状病毒Spike蛋白突变体的DNA序列，冠状病毒Spike蛋白突变体的氨基酸序列上不含有Furin蛋白酶裂解位点(RRAR)，所述冠状病毒Spike 蛋白突变体的编码序列不含有副黏病毒转录终止序列。