[发明专利]伊短菌素高产工程菌株及其应用

权利要求书

1.伊短菌素高产工程菌，其特征在于，其是利用同源重组技术将野生型短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)中伊短菌素生物合成基因簇的原始启动子P_ede替换为P_grac而得到的；所述启动子Pgrac的核苷酸序列GeneBank登录号为MH328010.1。

2.根据权利要求1所述的伊短菌素高产工程菌的制备方法，其特征在于，将启动子P_grac与抗性基因连接获得的融合片段，构建同源重组整合载体，利用同源重组技术将野生型短短芽孢杆菌中伊短菌素生物合成基因簇的原始启动子P_ede替换为P_grac得到相应的短短芽孢杆菌工程菌。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述抗性基因是Apra^R。

4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述抗性基因Apra^R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述伊短菌素生物合成基因簇的原始启动子Pede的核苷酸序列如SEQID NO：3所示。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述同源重组整合载体以载体pE194为出发载体，与所述融合片段及野生型短短芽孢杆菌中的ede操纵子中天然启动子区的上、下游同源序列片段构建得到同源重组整合载体。

6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述ede操纵子中天然启动子区的上游同源序列片段核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；ede操纵子中天然启动子区的下游同源序列片段核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

7.根据权利要求2至6任一项所述的制备方法，其特征在于，还包括对利用同源重组技术处理后的短短芽孢杆菌进行鉴定，所述鉴定的过程包括以抗性基因Apra^R的引物为探针对其进行PCR检测，以确保原始启动子P_ede为P_grac所替换。

8.权利要求1所述的伊短菌素高产工程菌在制备伊短菌素中的应用。

9.权利要求8所述的应用，其特征在于，将所述伊短菌素高产工程菌发酵，获得发酵液上清液，从中纯化伊短菌素。

10.权利要求9所述的应用，其特征在于，将伊短菌素高产工程菌活化后，接种于LB液体培养基中进行发酵，再将所述发酵得到的发酵液上清液进行阳离子交换树脂吸附、氨水洗脱后，经旋转蒸发后，再进行高效液相色谱分离后得到所述伊短菌素。

11.一种菌剂，其特征在于，含有如权利要求1所述的伊短菌素高产工程菌。