[发明专利]一种RNA保护剂及其应用

说明书

本发明公开了一种RNA保护剂，该保护剂中的β‑巯基乙醇、硫脲、乙二胺四乙酸二钠与盐酸胍共同作用可对RNase产生强烈的抑制作用，有效减弱核糖核酸酶对RNA的分解，有助于延长保持样本中RNA稳定性的时间。本发明还公开了一种RNA保护剂在保持样本中RNA稳定性的应用。经本发明得到的RNA保护剂保存的样本，其所含的RNA可用于所有关于RNA的后续实验，避免了液态保存RNA样本反复冻融对样本造成的损伤。本发明得到的RNA保护剂不影响RNA的完整性和活性，对RNA的保存、反复使用和长途运输具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种RNA保护剂及其应用。

背景技术

核糖核酸(Ribonucleic acid，RNA)存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。由于至少几十个核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成的一类核酸，因含核糖而得名。每个RNA分子都由核苷酸单元长链组成，每个核苷酸氮源含有一个含氮碱基、一个核糖和一个磷酸基。RNA为细胞的主要成分之一，参与细胞的各种功能活动，是生物学、医学和药学等生命有关学科的重要研究对象，RNA检测更是分子生物学研究的一个重要技术，包括生物芯片、基因表达矩阵分析和定量RT-PCR检测、分子诊断等。RNA检测在病原体感染临床诊断上具有下列优势：1.靶标为RNA，扩增启示模板数量高，检测灵敏度高；2.病原体死亡后，RNA降解速度快，检测结果可有效区分是否为一过性感染，有助于临床判愈及治疗方案选择，避免无效治疗。

但是，大多数情况下，由于各种各样的原因，RNA从生物样本中提取出来后并不能立刻得到检测。含RNA的生物样品一旦从体内采集分离，它的RNA会变得非常不稳定，极易被降解。造成RNA降解的外界物理因素如温度、湿度、紫外线灯；化学因素如pH值、水解反应、氧化反应等；生物因素如酶解及微生物侵染等。且RNA是单链结构，在提取过程或保存过程中都极易发生降解。

因此，RNA的提取和保存过程需要进行严格的处理，防止RNA发生特异或非特异的降解，以便于后续的研究使用。RNA保存过程中的质量和完整性对检测结果的准确性和可靠性有着重大影响。在生物样品中广泛存在并极度稳定的核糖核苷酸酶对RNA的水解作用很强，许多核糖核苷酸酶对RNA的降解作用不需要任何辅助因子，为RNA的纯化、储存和使用带来极大阻碍。针对组织样品，目前保存样品的方式主要为样品采集后直接低温保存，例如普遍应用的液氮保存。但是这种方法有较大的局限性，一是采用低温保存成本较高；二是对保存设备的有较高要求(例如液氮罐)，如果不能将新鲜采集的样品立刻置于液氮中，RNA分子可能发生降解，也可能有其他影响因素使RNA状态发生改变，给后续的实验带来操作误差。因此，提供能够有效防止RNA降解、不影响后续检测结果的RNA保护剂对RNA的分子生物学检测非常重要，也是目前RNA保存迫切需要解决的技术问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种RNA保护剂，该保护剂可有效保持运输、保存样本中RNA稳定性。

本发明的目的之二在于RNA保护剂在保持样本中RNA稳定性的应用。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种RNA保护剂，包括以下组分：盐酸胍、柠檬酸钠、β-巯基乙醇、硫脲、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基肌酸钠、海藻糖、吐温80、Proclin 300、溶剂。

进一步地，所述各组分的含量分别为：盐酸胍1～6mol/L、柠檬酸钠22～28mmol/L、β-巯基乙醇0.05-0.3mol/L、硫脲45～54mmol/L、乙二胺四乙酸二钠8～12mmol/L、十二烷基肌酸钠0.2～0.8wt％、海藻糖0.6～1.2wt％、吐温80(v/v)0.02～0.1％、Proclin 300(v/v)0.05～0.5％。