[发明专利]基于片段化酶的DNA文库制备方法

权利要求书

1.一种片段化酶，其特征在于，所述的片段化酶为H1组蛋白元件和FokI蛋白元件融合形成的融合蛋白，所述融合蛋白具有式I结构：

Z0―Z1―L2―Z2 (I)

式中，

Z0为无，或者选自：信号肽、标签序列、或其组合；

Z1为H1组蛋白元件；

Z2为FokI蛋白元件；

L2为无；

“―”为键；其中，

所述的H1组蛋白元件具有如SEQ ID NO:5的11-214位所示的氨基酸序列；和

所述的FokI蛋白元件具有如SEQ ID NO:5的215-410位所示的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的片段化酶，其特征在于，所述的片段化酶的氨基酸序列如SEQ IDNo: 5中第1-410位或SEQ ID No: 5中第11-410位所示。

3.一种片段化DNA的方法，其特征在于，包括步骤：

(a) 提供一如权利要求1-2中任一项所述的片段化酶；

(b) 将所述片段化酶与DNA样品混合反应，获得DNA片段；

其中，获得的DNA片段的长度为30-250bp。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，获得的DNA片段的长度为50-200bp。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，获得的DNA片段的长度为50-150bp。

6.一种如权利要求1-2中任一项所述的片段化酶的用途，其特征在于，用于制备构建DNA测序文库的试剂；或用于对DNA样品进行片段化处理的试剂。

7.一种DNA测序文库的构建方法，其特征在于，包括步骤：

(a) 提供一基因组DNA样品；

(b) 对所述DNA样品，通过如权利要求1-2中任一项所述的片段化酶进行片段化反应，获得含有DNA片段的第一混合物；

(c) 向(b)中所述第一混合物中的DNA片段的两端添加接头，获得含末端带有接头的DNA片段的第二混合物；

(d) 用特异性引物对上一步骤中获得的末端带有接头的DNA片段进行扩增，从而获得所述DNA测序文库，其中，所述特异性引物为特异性扩增所述第二混合物中的末端带有接头的DNA片段的引物。

8.如权利要求7所述的构建方法，其特征在于，步骤(b)和(c)在同一反应体系中同时、或先后进行。

9.一种构建DNA测序文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(Z1) 如权利要求1-2任一项所述的片段化酶；

(Y) 说明书，所述的说明书记载了使用方法。

10.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1所述的片段化酶。

11.一种载体，其特征在于，所述载体含有如权利要求10所述的核酸分子。

12.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求11所述的载体，或染色体中整合有外源的如权利要求10所述核酸分子，或表达如权利要求1所述的片段化酶。