[发明专利]一种核定位信号肽及其序列和应用

说明书

本发明公开了一种核定位信号肽及其序列和应用，所述信号肽的序列为PGPIRCRHRSKVS，编码所述信号肽的基因，得到信号肽的基因序列。所述的信号肽基因序列为5’‑CCGGGTCCTATCCGCTGCAGGCATCGATCGAAGGTTTCC‑3’。采用多肽作为核定位信号肽将目的蛋白定位于细胞核中，所述多肽序列为PGPIRCRHRSKVS。采用多肽作为核定位信号肽将目的蛋白定位于细胞核核仁中，所述多肽序列为PGPIRCRHRSKVS的2~5个串联。本发明是一种未被发现的入核信号序列，并且串联之后可以特异性定位于核仁区域。

技术领域

本发明涉及生物钟转录抑制因子CHRONO蛋白核定位NLS序列，以及该NLS序列在表达载体领域的应用技术领域，尤其涉及一种核定位信号肽及其序列和应用。

背景技术

将外源基因人工导入细胞的转基因技术是一种重要的技术，不仅仅是一种分析各种生物现象的基本技术，而且因为其在诸如基因治疗和有益动物生产方面的应用。

生物钟系统的核心主要是由BMAL1/CLOCK构成的转录激活复合物与转录抑制因子PER和CRY构成的负反馈调控环路。在2014年，研究发现这个负反馈环路中还存在另外一个全新的核心生物钟元件——CHRONO。虽然研究发现CHRONO是一个转录抑制因子，但是其在负反馈环路中执行功能的分子机制、对于生物钟系统的影响，以及CHRONO对于生物钟下游其它生理活动的影响仍不清楚。为了全面认识生物钟的调控系统，我们对于CHRONO展开了探索研究。CHRONO作为一个脊椎动物特有的基因，目前并没有同源基因或者蛋白的研究。CHRONO作为转录因子，需要进入细胞核内执行功能，而对于CHRONO的入核机制却没有任何信息。

发明内容

本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种核定位信号肽及其序列和应用，可将基因导入细胞核中。

本发明是通过以下技术方案实现的：

CHRONO作为转录因子，进入细胞核对于CHRONO来说是至关重要的。为了研究其入核的机制，通过对一系列截短体或者突变体与cpVenus融合蛋白的在不同细胞中的定位统计发现，CHRONO入核是依靠其N端的Pro Gly Pro Ile Arg Cys Arg His Arg Ser Lys ValSer序列，该核定位信号与经典的单簇信号K(K/R)X(K/R)相似，然而之前对CHRONO或者直接对该序列进行经软件预测后并未判定为核定位序列，说明CHRONO上发现的Pro Gly ProIle Arg Cys Arg His Arg Ser Lys Val Ser序列是一个新型的核定位序列。

将NLS信号与cpVenus蛋白融合表达，cpVenus获得细胞核定位的能力。

一种核定位信号肽，所述信号肽的序列为Pro Gly Pro Ile Arg Cys Arg HisArg Ser Lys Val Ser，编码所述信号肽的基因，得到信号肽的基因序列。

所述的信号肽基因序列为5’-CCGGGTCCTATCCGCTGCAGGCATCGATCGAAGGTTTCC-3’。

一种重组表达载体，载体包括所述的信号肽基因。

所述信号肽基因包括多个拷贝，即信号肽基因是通过多个信号肽基因序列并列组成的。

所述的多个拷贝是无间断的连续拷贝。

一种核定位信号肽的应用，采用多肽作为核定位信号肽将目的蛋白定位于细胞核中，所述多肽序列为Pro Gly Pro Ile Arg Cys Arg His Arg Ser Lys Val Ser。

一种核定位信号肽的应用，采用多肽作为核定位信号肽将目的蛋白定位于细胞核核仁中，所述多肽序列为Pro Gly Pro Ile Arg Cys Arg His Arg Ser Lys Val Ser的2～5个串联。