[发明专利]整合有氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，在大肠杆菌染色体的glsB、nupG、pitB位点上整合3~12个拷贝数的L-氨基酸氧化酶基因和葡萄糖脱氢酶基因；所述glsB位于染色体第1612325～1613251处；所述L-氨基酸氧化酶来源于Proteus mirabilis ATCC 29906或Cosenzaea myxofaciens ATCC 19692；所述葡萄糖脱氢酶来源于Gluconobacter suboxydans ATCC621、Haloferax mediterranei ATCC 33500或Bacillus subtilis ATCC 13952；所述整合是通过整合框整合所述L-氨基酸氧化酶基因和葡萄糖脱氢酶基因；所述整合框包括：整合位点左臂-L-氨基酸氧化酶基因，葡萄糖脱氢酶基因-整合位点右臂。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，所述大肠杆菌为E.coli BL21、E. coliJM109、E.coli DH5α或E. coliTop10。

3.根据权利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，还表达L-氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶参与的代谢途径中相关的基因。

4.根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，通过pET20B、pColdII、pETDuet-1或pACYCDuet-1表达所述相关的基因。

5.一种构建权利要求1~4任一所述基因工程菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）构建L-氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶基因整合框；所述整合框为：整合位点左臂-L-氨基酸氧化酶基因，葡萄糖脱氢酶基因-整合位点右臂；所述整合位点为glsB、nupG、pitB；

（2）将步骤（1）构建的L-氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶基因整合框转化至大肠杆菌电转感受态细胞中；所述大肠杆菌为E. coli BL21、E. coli JM109、E. coli DH5α或E. coliTop10。

6.一种全细胞催化剂，其特征在于，含有权利要求1~4任一所述的基因工程菌细胞；所述细胞是接种于培养基中，于22~30℃培养≥16 h后获得。

7.权利要求1~4任一所述基因工程菌在食品、生物领域参与氨基酸为底物反应中的应用。