[发明专利]一种HTLV-1 Env介导的细胞-细胞融合模型、制备方法及应用

说明书

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种HTLV‑1 Env介导的细胞‑细胞融合模型、制备方法及应用。本申请中获得HTLV‑1 Env基因片段，并替换载体pSRHS‑Tat‑Envsubgt;HIV‑1/subgt;的HIV‑1 Env基因中对应的gp145片段，转染效应细胞COS‑1，并与基因组中整合有LTR及其下游串联着的萤火虫荧光素酶报告基因的TZM‑bl细胞共培养；通过检测萤火虫荧光素酶的活性间接检测HTLV‑1 Env介导的细胞‑细胞融合能力。利用抑制多肽P‑400的对该融合系统进行验证，表明该系统非常适用于针对HTLV‑1病毒进入抑制剂的筛选和验证，以及对进入抑制剂有效浓度和毒性等指标进行评估。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种HTLV-1 Env介导的细胞-细胞融合模型、制备方法及应用。

背景技术

人类T淋巴细胞白血病1型病毒(HTLV-1)，最先由美国国立癌症研究所的罗伯特·盖洛研究组于1980年报道发现，为首个证明与人类癌症直接相关的逆转录病毒。目前全球范围内的感染者超千万，其感染可诱发成人T细胞白血病(ATL)和HTLV-1相关脊髓病变(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(也称为强直性下肢轻瘫，TSP)等多种疾病。尽管经过40年的研究，但至今仍没有针对HTLV-1感染的特效疗法和安全持久有效的疫苗制剂，HTLV-1感染仍是严重威胁人类健康的地方性流行病，并给全球社会经济发展造成很大压力。

进入抑制剂是一类重要的抗包膜病毒药物，它在病毒感染早期阶段阻断病毒复制的中心环节——入侵靶细胞，既能预防病毒感染，也能阻止病毒感染新的宿主细胞，降低血浆中的病毒载量，具有明显的优越性，越来越受到科研人员和药物研发人员的关注和重视，具有成为HTLV-1病毒感染有效疗法的潜力。新的强效进入抑制剂的筛选和鉴定对于人类的健康与社会的发展有着重要意义。

病毒是结构极其简单的微生物，无完整的代谢酶系统，需要借助宿主细胞合成自身物质，进而完成自身的生命周期。HTLV-1也是一种包膜病毒(又称囊膜病毒)，首先要通过膜融合入侵到宿主细胞内才能起始新的生命周期，因而是整个病毒复制周期的首要环节。包膜病毒一般通过两种方式进入宿主细胞。第一种方式，位于病毒表面的包膜糖蛋白与受体结合，诱导构象变化，导致病毒包膜和宿主细胞膜在细胞表面直接融合。第二种方式，病毒通过内吞途径入侵细胞，定位于胞内体，以pH和(或)蛋白酶依赖的方式触发包膜糖蛋白的构象变化，从而触发膜融合。

很久之前科研人员就发现，与人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)不同，游离的HTLV-1病毒粒子对CD4⁺T淋巴细胞的感染效率十分低下，这种情况适用于除树突细胞以外的大多数HTLV-1靶细胞类型。近期的研究发现，游离的HTLV-1病毒粒子可以高效地感染树突细胞。同时，被感染的树突细胞可以快速地、重复性地将HTLV-1转移给自体CD4⁺T细胞，造成CD4⁺T细胞的长期多产性感染，并导致T细胞的白介素-2非依赖性的转化。树突细胞作为重要的抗原呈递细胞，被认为是多种病原入侵后最先遭遇的细胞，因而很可能在HTLV-1的传播过程中起着关键作用。Alais等人通过精巧的实验证明了树突细胞比自体淋巴细胞对HTLV-1的感染更敏感，并可有效地将病毒传递给淋巴细胞。因而，树突细胞作为体内最先被HTLV-1感染的细胞，它很可能代表着一个真正的病毒库。