[发明专利]一种HTLV-1 Env介导的细胞-细胞融合模型、制备方法及应用

权利要求书

1.一种重组HTLV-1 Env表达质粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

利用滚环PCR技术将质粒pSRHS-Tat-Env_HIV-1 CRF07中HIV-1 Env中对应的gp145片段后面第一个氨基酸残基突变成终止密码子，获得突变体；用HTLV-1 Env全长片段替换所述突变体的HIV-1 Env基因的gp145片段，获得重组HTLV-1 Env表达质粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1；获得重组HTLV-1 Env表达质粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1后转化至Top10感受态细胞中；

所述HTLV-1 Env片段核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述gp145片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述滚环PCR技术涉及的点突变引物序列见SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；

滚环PCR法点突变反应体系：

；

滚环PCR法点突变反应条件：

。

2.一种按照权利1所述的重组HTLV-1 Env表达质粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1的构建方法构建的质粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1。

3.如权利要求2所述的质粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1在HTLV-1 Env介导的细胞-细胞融合体系中的应用。

4.如权利要求2所述的质粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1在针对HTLV-1病毒的进入抑制剂筛选和/或验证方面的应用，该应用仅用于非疾病治疗及诊断目的。

5.一种HTLV-1 Env介导的细胞-细胞融合体系，其特征在于，包括：效应细胞COS-1，权利要求2所述的质粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1以及靶细胞TZM-bl。

6.如权利要求5所述的HTLV-1 Env介导的细胞-细胞融合体系在针对HTLV-1病毒的进入抑制剂筛选和/或验证方面的应用，该应用仅用于非疾病治疗及诊断目的。