[发明专利]抗人MSLN单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗人MSLN单克隆抗体及其应用，其是以人源MSLN为靶点，基于噬菌体展示技术，开发的特异性、高亲和力的单链抗体。相对于现有技术，本发明成功制备了抗人MSLN单克隆抗体，该抗体特异性好，亲合力较高，并可结合细胞表面表达的人源MSLN，该抗人MSLN单克隆抗体是肿瘤治疗的潜在药物。

技术领域

本发明属于单克隆抗体技术领域，特别涉及一种抗人MSLN单克隆抗体及其应用。

背景技术

间皮素（mesothelin，MSLN）是位于细胞表面的40KD的糖蛋白，通过糖基磷脂酰肌醇锚定于细胞膜上。间皮素基因编码一种69kDa的前体蛋白，被弗林蛋白酶（成对碱性氨基酸蛋白酶，furin）样转化酶水解为两条链，C端约40KD的膜结合蛋白即为成熟的间皮素，N端约30KD称之为巨核细胞促进因子（MPF）的片断脱落并释放出细胞外。MPF和膜锚MSLN均为N-糖基化，MPF可在体外促进巨核细胞克隆的形成，膜锚MSLN可以与MUC16互作，在细胞粘附过程中起重要作用，因此目前靶向治疗中均选择膜锚MSLN做为靶点，故目前MSLN专指MSLN的C端40KD片段，即膜锚MSLN。

在正常情况下，MSLN仅低表达于胸膜、腹膜、心包膜等间皮组织中，在其它组织中不表达，表达谱极窄。但在癌变组织中，MSLN的强表达却极其普遍，目前已在间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、食道癌和转移性三阴性乳腺癌等多种实体瘤肿瘤组织中检测到很高的表达量。就癌细胞系而言，已知MSLN高表达于HO-8910、HEY-T30、OVCAR3（特别是HO-8910）三种卵巢癌细胞系、转移胰腺癌细胞系 AsPC1和宫颈癌细胞系Hela中，在SKOV3、3AO二种卵巢癌细胞系和肺腺癌细胞系A549极低表达，而在人肝癌细胞系Huh7不表达。

MSLN的生物学功能至今尚不清楚，与癌症关系亦不明确，究竟是癌症发生后MSLN表达随之上升还是MSLN上升促进了癌症的发生。据报道MSLN过表达会引起金属蛋白酶9的过表达，从而促进肿瘤细胞的迁移和浸润。MSLN也能通过与CA125相互作用介导细胞粘附，在肿瘤腹膜转移的侵袭过程中发挥重要作用，且能够促进肿瘤细胞抗死亡。在临床实践中，血清MSLN已被作为诊断卵巢癌和间皮瘤的检测指标。

MSLN在正常细胞中几乎不表达（仅低表达于胸膜、腹膜、心包膜）而在多种癌组织中强烈表达的特点，使其成为靶向治疗的良好靶点，决定了以其做为靶点的靶向治疗天然具有脱靶效应低的潜在优势。比如MSLN在60-90%的肺癌组织中表达，其中20%表达量较高，但在正常肺组织中不表达，且MSLN高表达的肺腺癌预后较差，提示MSLN是治疗肺癌的一个潜在靶标。实验证实，以MSLN为靶点的CART经尾静脉回输荷瘤小鼠后，皮下接种高表达MSLN的肺腺癌组织造成的肿瘤体积增长明显被抑制。

鉴于以MSLN为靶点的靶向治疗展现出的效果明显、可能的脱靶效应低的特点，以MSLN为靶点的治疗方案向多个方向展开研发，包括重组单克隆抗体药、抗体偶联药物、疫苗和过继性免疫细胞治疗等，其中由美国国立癌症研究所研发的Amatuximab单抗已完成治疗恶性间皮瘤的二期临床试验。

就目前研发中的抗体而言，虽然已知的许多间皮素单克隆抗体都是可用的，但是没有一个可以展现出针对于肿瘤细胞的补体依赖性细胞毒性（CDC)。由此可见，利用传统杂交瘤技术获得强CDC效应的靶向MSLN的抗体是一件困难的事情。比如传统方法获得的抗体组织穿透力差、治疗效果不足、免疫原性强、需要人源化改造、稳定性差、运输和保存要求高、研发和使用费用高。总之，已有的传统抗体尽管为疾病的治疗/检测起到了极其重要的作用，但其不足之处亦很明显。

针对MSLN靶点，目前临床药物有14个，研发最快的Amatuximab单抗（MORAb- 009）完成二期临床试验。就其抗体类型来说，这14个抗体中，有些为人-鼠嵌合抗体，有些为人源化抗体，均来源于小鼠，采用杂交瘤技术获得。就靶向MSLN的抗体而言，目前尚未有全人源ScFv抗体研发的公开报道，而基于噬菌体展示技术的靶向MSLN的抗体筛选方案目前亦未见公开报道。

发明内容