本发明公开了抗HLA‑A2/WT1复合物的单域抗体及其制备方法与应用。所述单域抗体包含抗原决定簇互补区和骨架区，所述抗原决定簇互补区包括分别与SEQ ID NO.2、4和6所示的氨基酸序列具有至少75％以上的同一性的CDR1、CDR2和CDR3。本发明还涉及衍生自所述单域抗体的衍生抗体、与所述抗体相关的生物材料，制备所述抗体的方法以及所述抗体在制备用于结合表达HLA‑A2/WT1复合物的T细胞的产品中的应用。本发明所述抗体能够在大肠杆菌内更高效表达，并与所述复合物具有更高的结合率，更适合应用于制备用于检测所述复合物的检测试剂、肿瘤抑制剂或肿瘤细胞抑制剂、以及抑制HLA‑A2/WT1复合物活性和促进T细胞增殖的药物。
本发明涉及包含双特异性T细胞激动剂CD3‑FAP/nanoBiTE的多肽，编码该多肽的多核苷酸，所述多肽和多核苷酸的制备方法，及其应用。所述双特异性T细胞激动剂CD3‑FAP/nanoBiTE是基于纳米抗体的新型双特异性T细胞激动剂(bispecific T cell engager，BiTE)‑CD3‑FAP/nanoBiTE，其诱导T细胞靶向肿瘤细胞，发挥抗肿瘤效应，为BiTE的肿瘤细胞免疫靶向治疗提供一种新的策略。
本发明涉及一种分泌CTLA‑4纳米抗体靶向FAP的CAR T细胞及其制备方法和应用，所述CAR T细胞是嵌合抗原受体FAP VHH‑HIStag‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑CTLA‑4VHH‑GFP修饰的T细胞，所述嵌合抗原受体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CAR T细胞的制备方法包括：构建重组慢病毒载体、包装慢病毒、慢病毒感染T细胞、进行体外诱导、扩增培养及获得工程化分泌CTLA‑4纳米抗体靶向FAP的CAR T细胞，FAP‑CTLA‑4/Nb CAR T细胞在对FAP阳性肿瘤细胞具有较好的杀伤作用，FAP‑CTLA‑4/Nb CAR T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用与肿瘤相关细胞FAP的表达量有关，为肿瘤的过继性免疫治疗提供了新策略。
