[发明专利]可延缓肿瘤生长的β-CD-PEG-G分子的合成及作为药物递送系统的应用

权利要求书

1.本发明β-CD-PEG-Guanosine聚集体及负载阿霉素(Dox)的纳米药β-CD-PEG-G-Dox；其中，环糊精为(6A-Azido-6A-deoxy-β-cyclodextrin，简写为β-CD-N₃)与5-己炔酸(5-Hexynoic Acid)通过CLick反应生成产物S1(β-CD-C₆H₈N₃O₂)；然后由PEG(21-Amino-4,7,10,13,16,19-hexaoxahenicosanoic Acid,简写为PEG)和2',3'-异亚丙基鸟苷(2',3'-isopropyLidene guanosine，简写为G)通过酯化反应生成S2(PEG-G)；最后由S1和S2通过酰胺反应得到环糊精-PEG-异亚丙基鸟嘌呤核苷分子(β-CD-PEG-G)分子式如下：

2.本发明β-CD-PEG-G聚集体及负载阿霉素(Dox)的纳米药β-CD-PEG-G-Dox的制备方法是首先合成β-CD-PEG-G分子，然后确定β-CD-PEG-G分子能否在水中进行自组装及自组装后的聚集体形貌；其次，将亲脂性的抗癌药物阿霉素负载到β-CD-PEG-G纳米载体中形成β-CD-PEG-G-Dox纳米药，采用有机溶剂挥发法进行阿霉素的包载，并确定包载率；然后，体外模拟肿瘤微环境对β-CD-PEG-G-Dox纳米药进行体外释放研究，确定pH值对β-CD-PEG-G-Dox纳米药体外释放的影响；最后，评价β-CD-PEG-G聚集体的细胞毒性及β-CD-PEG-G-Dox纳米药的抗癌活性和抗肿瘤效果。

3.本发明β-CD-PEG-G分子的合成方法：

S1分子的合成：将43.1mg(0.1742mmoL)硫酸铜溶解于40mL DMF-H₂O溶液(V_DMF:V_H2O＝10:1)中,然后加入34.2mg(0.1742mmoL)L-抗坏血酸钠，超声溶解。再依次分别加入100.2mg(0.08621mmoL)β-CD-N₃(6A-Azido-6A-deoxy-β-cyclodextrin)和19.0μL(0.17242mmoL)5-己炔酸，超声溶解，在氮气保护下室温搅拌48h。冷冻干燥得粗品。粗品经HP-20大孔树脂纯化，洗脱剂用甲醇洗脱，最后将含有β-CD-C₆H₈N₃O₂的洗脱液收集并进行冷冻干燥，得到β-CD-C₆H₈N₃O₂纯品。

S2分子的合成：取112.6mg(0.4244mmoL)2',3'-异亚丙基鸟苷(鸟苷)以及100.2mg(0.2829mmoL)H₂N-PEG-COOH于圆底烧瓶中，加入20mL DMF超声使其溶解。然后再加入65.08mg(0.3395mmoL)EDC,41.47mg(0.3395mmoL)DMAP,400μL(0.3395mmoL)DIPEA超声溶解，室温下搅拌24h。冷冻干燥混合液得到样品粗品。用中性氧化铝作为固定相，用二氯甲烷：甲醇(95：5–9：1)洗脱液洗脱。最后将含有PEG-G的洗脱液收集并进行冷冻干燥，得到PEG-G纯品。

β-CD-PEG-G分子的合成:取0.115g产物S₁(0.13559mmoL)于圆底烧瓶中，超声溶解于200mL DMF中,然后依次加入27.2mg(0.13559mmoL)DCC,16mg NHS(0.13559mmoL)，超声溶解，室温下搅拌12h，再加入0.1903g S₂(0.3076mmoL)，室温下继续搅拌24h，使其充分反应。然后将反应后的溶液冷冻干燥得样品粗品。使用中性氧化铝作为固定相,采用二氯甲烷：甲醇(99：1-5：5)洗脱剂洗脱，最后将含有β-CD-PEG-G的洗脱液收集并进行冷冻干燥，得到β-CD-PEG-G纯品。

4.本发明采用有机溶剂挥发法对载体进行阿霉素的包载，得到β-CD-PEG-G-Dox纳米药。