[发明专利]马短串联重复序列的复合扩增体系及检测试剂盒有效
申请号: | 202010168082.6 | 申请日: | 2020-03-11 |
公开(公告)号: | CN111378763B | 公开(公告)日: | 2022-08-19 |
发明(设计)人: | 杨宇泽;冯涛;路永强;刘杰;常卓;赵春颖 | 申请(专利权)人: | 北京市畜牧总站 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12N15/11 |
代理公司: | 北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙) 11498 | 代理人: | 王加岭;杨静 |
地址: | 100107 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 串联 重复 序列 复合 扩增 体系 检测 试剂盒 | ||
1.马短串联重复序列的复合扩增体系,其特征在于,该复合扩增体系中包括可同时扩增16个STR位点HMS7、HMS2、HMS3、AHT4、VHL20、LEX33、UCDEQ425、LEX34、COR58、COR7、COR18、COR71、COR82、Chr20、Chr29、Chr3的引物,所述引物分别为:
扩增HMS7的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示,
扩增HMS7的下游引物序列如SEQ ID NO.2所示;
扩增HMS2的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示,
扩增HMS2的下游引物序列如SEQ ID NO.4所示;
扩增HMS3的上游引物序列如SEQ ID NO.5所示,
扩增HMS3的下游引物序列如SEQ ID NO.6所示;
扩增AHT4的上游引物序列如SEQ ID NO.7所示,
扩增AHT4的下游引物序列如SEQ ID NO.8所示;
扩增VHL20的上游引物序列如SEQ ID NO.9所示,
扩增VHL20的下游引物序列如SEQ ID NO.10所示;
扩增LEX33的上游引物序列如SEQ ID NO.11所示,
扩增LEX33的下游引物序列如SEQ ID NO.12所示;
扩增UCDEQ425的上游引物序列如SEQ ID NO.13所示,
扩增UCDEQ425的下游引物序列如SEQ ID NO.14所示;
扩增LEX34的上游引物序列如SEQ ID NO.15所示,
扩增LEX34的下游引物序列如SEQ ID NO.16所示;
扩增COR58的上游引物序列如SEQ ID NO.17所示,
扩增COR58的下游引物序列如SEQ ID NO.18所示;
扩增COR7的上游引物序列如SEQ ID NO.19所示,
扩增COR7的下游引物序列如SEQ ID NO.20所示;
扩增COR18的上游引物序列如SEQ ID NO.21所示,
扩增COR18的下游引物序列如SEQ ID NO.22所示;
扩增COR71的上游引物序列如SEQ ID NO.23所示,
扩增COR71的下游引物序列如SEQ ID NO.24所示;
扩增COR82的上游引物序列如SEQ ID NO.25所示,
扩增COR82的下游引物序列如SEQ ID NO.26所示;
扩增Chr20的上游引物序列如SEQ ID NO.27所示,
扩增Chr20的下游引物序列如SEQ ID NO.28所示;
扩增Chr29的上游引物序列如SEQ ID NO.29所示,
扩增Chr29的下游引物序列如SEQ ID NO.30所示;
扩增Chr3的上游引物序列如SEQ ID NO.31所示,
扩增Chr3的下游引物序列如SEQ ID NO.32所示;
所述复合扩增体系还包括1对能扩增AMEL的引物,其上游引物序列如SEQ ID NO.33所示,
其下游引物序列如SEQ ID NO.34所示;
所述复合扩增体系扩增时的反应条件为:第1步:95℃预变性5min,第2步:94℃变性45sec,第3步:56℃退火1min,第4步:72℃延伸1min,重复第2~4步35次,最后60℃延伸60min;
各引物的用量浓度为:LEX34,0.5 μM;AMEL,0.5 μM;Chr20,1.5 μM;Chr3,4 μM;AHT4,5μM;COR7,0.4μM;COR71,2μM;HMS2,2μM;Chr29,1.5 μM;COR82,1.5 μM;UCDEQ425,1.5 μM;LEX33,5 μM;HMS7,5 μM;COR58,0.5 μM;VHL20,2 μM;COR18,5 μM;HMS3,5 μM。
2.如权利要求1所述复合扩增体系,其特征在于,所述扩增体系中的各引物分别由四种荧光染料标记,相同荧光标记视为同一组,四组组合分别为:第一组LEX34、AMEL、Chr20、Chr3、AHT4;第二组COR7、COR71、HMS2、Chr29;第三组COR82、UCDEQ425、LEX33、HMS7;第四组COR58、VHL20、COR18、HMS3。
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