[发明专利]一种高纯度门冬酰胺酶的制备方法

权利要求书

1.一种制备门冬酰胺酶的方法，包括：a)将门冬酰胺酶溶液经弱阳离子复合填料的层析柱纯化，所述复合填料选自Capto MMC填料或Bestarose Diamond MMC填料；b)随后再经阴离子层析柱纯化，所述阴离子层析柱填料选自Diamond Q Mustang填料；c)再将步骤b)所得洗脱液经阳离子层析柱纯化，所述阳离子层析柱填料选自Capto SPImpRes填料，

阴离子层析柱洗脱用缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟基氨基甲烷盐缓冲液、甘氨酸盐缓冲液、铵盐缓冲液，所述阴离子层析柱洗脱用缓冲液pH为7.0～9.0；

阳离子层析柱洗脱用缓冲液(2)选自乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液，所述缓冲液(2)pH为3.0～5.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，阴离子层析柱洗脱用缓冲液选自磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液、三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液或氯化铵-氨水缓冲液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述阴离子层析柱洗脱用缓冲液中还含有盐，所述盐在溶液中浓度为0.3～1.0M。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸钠或硫酸钾。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液(2)选自乙酸钠-乙酸缓冲液、乙酸钾-乙酸缓冲液、柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸钾-柠檬酸缓冲液或磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述缓冲液(2)中还含有盐，所述盐在溶液中浓度为0.3～1.0M。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸钠或硫酸钾。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用碱性缓冲液洗脱弱阳离子复合填料。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述碱性缓冲液pH为7.0～9.0。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述碱性缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟基氨基甲烷盐缓冲液、甘氨酸盐缓冲液或铵盐缓冲液。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述碱性缓冲液选自磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液或甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述碱性缓冲液浓度选自20～150mM。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括生产门冬酰胺酶的菌体在碱性条件下破壁后，经酸性条件沉淀，过滤的步骤。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述碱性条件pH10.0～12.0；所述酸性条件pH4.0～5.0。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，过滤方式选自离心过滤、死端过滤或切向流过滤。

16.一种制备门冬酰胺酶药物组合物的方法，包括：权利要求1-15任意一项所述方法，以及将经阳离子层析柱所得洗脱液冻干的步骤。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，还包括将经阳离子层析柱所得洗脱液经置换后，加入甘露醇和无机盐混匀得门冬酰胺酶溶液(2)的步骤，所述无机盐选自磷酸盐或柠檬酸盐中的至少一种。

18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述无机盐选自磷酸钠或柠檬酸钠。