[发明专利]使用阻断性寡核苷酸进行选择性扩增在审
| 申请号： | 201880014793.9 | 申请日： | 2018-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN110382708A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 艾琳·夏姆;格伦·K·弗 | 申请（专利权）人： | 赛卢拉研究公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C12Q1/6848 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 武晶晶;杨淑媛 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 选择性扩增 核酸 选择性除去 寡核苷酸 核酸靶 阻断性 期望 延伸 扩增 | ||
1.一种选择性扩增方法，该方法包括：
提供包含多种核酸靶分子和一种或多种不期望的核酸种类的样品；
提供多种寡核苷酸探针，其中该多种寡核苷酸探针中的每一种包含分子标记序列和结合区；
使该多种寡核苷酸探针与该多种核酸靶分子接触以进行杂交；
延伸与该多种核酸靶分子杂交的寡核苷酸探针以生成多种延伸产物；
提供特异性结合该一种或多种不期望的核酸种类中的至少一种的阻断性寡核苷酸；以及
扩增该多种延伸产物以生成多种扩增子，
由此该阻断性寡核苷酸减少该不期望的核酸种类的扩增或延伸。
2.一种选择性延伸方法，该方法包括：
提供包含多种核酸靶分子和一种或多种不期望的核酸种类的样品；
提供多种寡核苷酸探针，其中该多种寡核苷酸探针中的每一种包含分子标记序列和结合区；
使该多种寡核苷酸探针与该多种核酸靶分子接触以进行杂交；
提供特异性结合该一种或多种不期望的核酸种类中的至少一种的阻断性寡核苷酸；以及
延伸与该多种核酸靶分子杂交的寡核苷酸探针以生成多种延伸产物；
由此该阻断性寡核苷酸减少该不期望的核酸种类的延伸。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中该阻断性寡核苷酸是锁核酸(LNA)、肽核酸(PNA)、DNA、LNA/PNA嵌合体、LNA/DNA嵌合体、或PNA/DNA嵌合体。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，该方法包括提供阻断性寡核苷酸，这些阻断性寡核苷酸特异性结合该样品中的两种或更多种不期望的核酸种类。
5.如权利要求1-3中任一项所述的方法，该方法包括提供阻断性寡核苷酸，这些阻断性寡核苷酸特异性结合该样品中的至少10种不期望的核酸种类。
6.如权利要求1-3中任一项所述的方法，该方法包括提供阻断性寡核苷酸，这些阻断性寡核苷酸特异性结合该样品中的至少100种不期望的核酸种类。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该阻断性寡核苷酸的Tm为至少60℃。
8.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该阻断性寡核苷酸的Tm为至少65℃。
9.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该阻断性寡核苷酸的Tm为至少70℃。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中该阻断性寡核苷酸不能用作逆转录酶或聚合酶的引物。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该不期望的核酸种类的扩增或延伸减少至少50％。
12.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该不期望的核酸种类的扩增或延伸减少至少80％。
13.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该不期望的核酸种类的扩增或延伸减少至少90％。
14.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该不期望的核酸种类的扩增或延伸减少至少95％。
15.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该不期望的核酸种类的扩增或延伸减少至少99％。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该阻断性寡核苷酸长10nt至50nt。
17.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该阻断性寡核苷酸长20nt至30nt。
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