[发明专利]靶向RyR2蛋白的胞内纳米抗体在制备抗心力衰竭药物中的用途

说明书

本发明涉及生物医药工程技术领域，提供了一种靶向II型兰尼碱受体(Ryanodine Receptor 2，RyR2)的纳米抗体、编码纳米抗体的多核苷酸序列、包含其的载体和药物及其用途。该靶向RyR2蛋白的纳米抗体具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，编码该纳米抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，通过实验验证，靶向RyR2蛋白的纳米抗体在小动物疾病模型中具有较高的表达水平，使得实验动物左心室射血分数相比对照组存在不同程度的提高，同时能够有效降低疾病动物模型心肌细胞RyR2磷酸化水平。因此，本发明的靶向RyR2蛋白的纳米抗体能够对心力衰竭起到有效的缓解和治疗作用，可用于制备治疗心力衰竭的药物，具备广阔的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，具体涉及用于增强心肌细胞收缩力、靶向II型兰尼碱受体(Ryanodine Receptor 2，RyR2)的纳米抗体、编码纳米抗体的多核苷酸序列、包含其的载体和药物及其用途。

背景技术

心力衰竭是大多数心脏疾病发展的终末阶段，是人类发病率和死亡率最主要的原因之一，且在全世界范围内，心力衰竭的发病率不断的增加。目前的药物治疗虽然对控制心衰的疾病症状和致死率起到了一定作用，但是无法从根本上逆转疾病发展，50％的心衰患者会在五年内死亡。

在细胞水平上，心力衰竭主要表现心肌细胞的收缩异常和节律异常。21世纪以来，科研人员对心衰中细胞及分子机制的认识有了长足的进步，但针对其中许多关键靶点的药物开发相对困难缓慢，甚至存在无法直接干预的可能性，因此，基因治疗就成为一种新的有效手段。科学技术的进步和大量动物试验中获得的喜人的结果为基因转导心肌细胞遏制人类心衰疾病的发展打下良好的基础，最新的介入手段和载体技术大大提高了心衰疾病基因治疗的可能。

心肌细胞的钙循环和钙稳态由多个关键蛋白质维持，钙循环的紊乱可以导致多种肌细胞病理过程，如心功能不全、收缩性心室功能障碍、心律失常、心力衰竭、心源性休克、心肌梗死和心脏瓣膜功能障碍。心肌细胞肌浆网上的2型兰尼碱受体(Ryanodine Receptor2，RyR2，UniProtKB编号：Q92736)是主要的钙释放通道，RyR2释放的钙离子数量决定了钙瞬变的幅度，心肌细胞收缩的能力又取决于钙瞬变的幅度。在心力衰竭这个病理状态过程中，前期研究结果显示，在心衰患者和疾病动物模型中都可以观察到RyR2特定位点的异常修饰，如RyR2第2808位丝氨酸残基磷酸化，第2814位丝氨酸残基磷酸化等(Wehrens X H T,Lehnart S E,Reiken S,et al.Ryanodine receptor/calcium release channel PKAphosphorylation:a critical mediator of heart failure progression[J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2006,103(3):511-518；RespressJ L,van Oort R J,Li N,et al.Role of RyR2 phosphorylation at S2814 duringheart failure progression[J].Circulation research,2012:CIRCRESAHA.112.268094.)。一般认为RyR2特定位点的异常修饰后可以导致蛋白构象发生一定改变，致使通道开关蛋白FKBP12.6解离，增加了钙离子通道打开的概率，每次释放的钙离子数量减少，从而增强了钙泄露的病理过程。

因此，利用生物医学手段减少心肌病理过程中的RyR2异常修饰是亟待解决的科学问题。

发明内容

本发明的目的在于，依托上述研究背景，提供一种新型增强心肌细胞收缩力的靶向II型兰尼碱受体(Ryanodine Receptor 2，RyR2)的纳米抗体、编码纳米抗体的多核苷酸序列、包含其的载体和药物及其用途。

本发明的第一方面，提供了一种靶向RyR2蛋白的纳米抗体，该纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：