[发明专利]猪ω7干扰素突变体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了猪ω7干扰素突变体及其制备方法和应用。本发明首先公开了氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的猪ω7干扰素以及将其进行单位点突变获得的序列为SEQ ID NO.3所示的抗病毒活性提高的突变体。本发明将该突变体编码基因进行密码子优化得到抗病毒活性明显提升的优化基因。本发明还将SEQ ID NO.3所示突变体分别进行氨基酸单位点突变、双位点突变和多位点突变获得多个抗病毒活性显著提高的猪ω7干扰素突变体。本发明利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕生物反应器中表达所述猪ω7干扰素突变体，所表达产物的抗病毒活性大幅提高。本发明提供的猪ω7干扰素突变体能够用于制备预防或治疗猪病毒性疾病的药物或试剂。

技术领域

本发明涉及猪ω7干扰素以及抗病毒活性提高的猪ω7干扰素突变体，本发明还涉及一种利用家蚕杆状病毒表达系统制备所述猪ω7干扰素或其突变体的方法；本发明进一步涉及所述猪ω7干扰素或其突变体在制备预防或治疗猪病毒性疾病的药物或试剂中的应用，属于猪ω7干扰素突变体的制备及应用领域。

背景技术

干扰素是一类具有抗病毒、抗肿瘤、刺激免疫应答的蛋白质家族，在人和动物体内起到抵御病毒入侵、杀伤肿瘤细胞、刺激体液免疫及细胞免疫、调节生理平衡等方面的重要作用。IFN蛋白家族根据其编码基因的序列、染色体定位和受体特异性分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干扰素。Ⅰ型干扰素包括IFN-α、IFN-β、IFN-ω、IFN-δ、IFN-ε、IFN-ζ、IFN-τ等。Ⅱ型干扰素只有IFN-γ一个成员，又称为免疫干扰素，主要作用是激活巨噬细胞杀灭微生物。Ⅲ型干扰素是新发现的细胞因子，包括λ1(IL-29)、λ2(IL-28a)和λ3(IL-28b)。

干扰素ω是首先在人类中发现的。在猪的Ⅰ型干扰素中已有报道的有IFN-α、IFN-β、IFN-ω、IFN-δ等，这些基因均排列在家猪1号染色体上。

猪是常见的大规模养殖家畜之一，猪肉人们日常食用肉类之一。它含有人体所需要的多种营养成分。在500克猪瘦肉中，蛋白质为84.5克，脂肪146克，糖类5克，钙55毫克，磷850毫克，铁12毫克，维生素B12.65毫克，维生素B20.6毫克，尼克酸21毫克。在医疗保健方面，猪肉性平味甘，有润肠胃、生津液、补肾气、解热毒的功效，主治热病伤津、消渴羸瘦、肾虚体弱、产后血虚、燥咳、便秘、补虚、滋阴、润燥、滋肝阴、润肌肤、利小便和止消渴。猪肉煮汤饮下可急补由于津液不足引起的烦燥、干咳、便秘和难产；然而，一些病毒性疾病影响着猪养殖业的生存和发展，也影响着人们的日常生活。

因此，提供具有高病毒活性且制备成本低廉的猪ω干扰素对于防治影响猪养殖业的生存和发展的病毒性疾病等具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种猪ω7干扰素；

本发明的目的之二是提供抗病毒活性有显著提升的猪ω7干扰素突变体；

本发明的目的之三是将猪ω7干扰素突变体的编码基因按照家蚕密码子偏好性对其进行密码子优化得到抗病毒活性提升的优化基因；

本发明的目的之四提供一种利用家蚕杆状病毒表达系统制备所述猪ω7干扰素或猪ω7干扰素突变体的方法；

本发明的目的之五是将所述猪ω7干扰素或猪ω7干扰素突变体应用于预防或治疗猪病毒性疾病。

为实现上述目的，本发明提供了以下解决技术方案：

本发明首先公开了一种猪ω7干扰素，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，其编码基因的多核苷酸序列为(a)、(b)或(c)所示：

(a)SEQ ID No.2所示的多核苷酸序列；或

(b)与SEQ ID No.2的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的多核苷酸序列，该多核苷酸编码的蛋白仍具有干扰素的功能或活性；或