[发明专利]一种用于纯化蛋白的表达载体

说明书

本发明提供了一种用于纯化蛋白的表达载体，上述表达载体包括S100蛋白家族基因编码序列以及其他载体元件，上述S100蛋白家族基因编码序列位于能够正常表达的区域。本发明提供了一种用于纯化蛋白的表达载体，以至少解决现有技术中用于纯化蛋白的表达载体操作复杂成本高的技术问题，本发明提出的新的纯化蛋白的表达载体，操作方便，成本低，纯化效果好。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，更具体地，涉及一种用于纯化蛋白的表达载体。

背景技术

对于纯化分子量小于60千道尔顿(kDa)的蛋白，现有技术采用的方法是电泳、离子交换、蛋白沉淀、亲和层析等，但这些纯化方法单一使用各有缺陷，比如蛋白沉淀纯化效果差；电泳的分离效果好，但制备量太低，不适用于大规模制备；离子交换：即便是用最精确控制的条件，仅用离子交换单一的方法也得不到纯的蛋白，还需要其他的纯化步骤；亲和层析：单抗非常昂贵，而且也需先纯化，单抗与目的蛋白结合力太强.要用苛刻的条件来洗脱，这会使目的蛋白失活并破坏单抗，混合物中的其他蛋白如蛋白酶也可能破坏抗体或与它们非特异结合，某些单抗也会在纯化过程中从树脂上解离下来混入产物中，也需要从终产物中去除。即便是这些方法和其他方法配合使用，也很难得到纯化度很高的蛋白，并且操作复杂，现有技术中纯化蛋白较好的蛋白纯化仪(AKTA)价格太昂贵，故有待提出一种新的用于纯化蛋白的表达载体，以方便纯化蛋白使用。

发明内容

本发明提供了一种用于纯化蛋白的表达载体，以至少解决现有技术中用于纯化蛋白的表达载体操作复杂成本高的技术问题。

本发明提供了一种用于纯化蛋白的表达载体，上述表达载体包括S100蛋白家族基因编码序列以及其他载体元件，上述S100蛋白家族基因编码序列位于能够正常表达的区域。

可选的，上述其他载体元件包括多克隆位点、筛选标记、操纵子、启动子以及终止子，上述多克隆位点区内包括上述S100蛋白家族基因编码序列。

可选的，上述表达载体是原核表达载体或真核表达载体。

可选的，上述S100蛋白家族基因编码序列为S100A蛋白家族基因编码序列、S100B蛋白家族基因编码序列、S100C蛋白家族基因编码序列、S100D蛋白家族基因编码序列、S100E蛋白家族基因编码序列、S100F蛋白家族基因编码序列、S100P蛋白家族基因编码序列、S100G蛋白家族基因编码序列、S100L蛋白家族基因编码序列或S100Z蛋白家族基因编码序列。

可选的，上述S100A蛋白家族基因编码序列为S100A1、S100A2、S100A3、S100A4、S100A5、S100A6、S100A7、S100A8、S100A9、S100A10、S100A11、S100A12、S100A13、S100A14、S100A15或S100A16。

一种制备任一上述的表达载体的方法，包括如下步骤：

1)合成上述S100蛋白家族基因编码序列，上述S100蛋白家族基因编码序列上游添加第一限制性内切酶酶切割位点识别序列，上述S100蛋白家族基因编码序列下游添加第二限制性内切酶酶切割位点识别序列；

2)用上述第一限制性内切酶与上述第二限制性内切酶对上述S100蛋白家族基因编码序列和第二表达载体进行酶切反应，得到酶切产物，上述第二表达载体包含上述其他载体元件；

3)将上述步骤2)的上述酶切产物进行连接，得到连接产物；

4)将上述步骤3)的上述连接产物转化感受态细胞，进行培养，得培养产物；

5)对上述步骤4)中的上述培养产物进行筛选鉴定；

6)将上述步骤5)中鉴定为阳性的上述培养产物进行扩大培养，得扩大培养产物；

7)收集上述步骤6)中含扩大培养产物的液体，离心获得沉淀；