[发明专利]特异性识别小鼠Doppel蛋白的单克隆抗体

说明书

本发明公开了特异性识别小鼠Doppel蛋白的单克隆抗体，属于生物医学技术领域。所述单克隆抗体能够与天然鼠脑和原核细胞表达的Doppel结合，特异性识别Doppel蛋白的82～90位氨基酸残基，该82～90位氨基酸残基的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明克隆了1A9和1D6两株单克隆抗体的重链可变区基因，获得了重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认了这些基因序列与蛋白序列的唯一性。鉴于识别的表位序列NYWQFPDGI在小鼠、大鼠和人Doppel蛋白完全相同，显示这2株单克隆抗体在研究Doppel蛋白功能方面有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及特异性识别小鼠Doppel蛋白的单克隆抗体重链可变区及其基因。

背景技术

小鼠Doppel蛋白发现于1999年，因为其基因位于小鼠正常朊蛋白基因(Prnp)下游16kb处、且结构与功能和小鼠、人朊蛋白(Prion)类似，因此从原始描述Prnpdownstreamprion-like protein而得名Doppel(Doppel在德语中意为“双的，双重的”，缩写为Dpl，中文译为“叠朊蛋白”)。

小鼠Doppel蛋白基因(Prnd)的序列相对保守，和鱼类、四足动物、牛、羊以及人类的基因同源性较大，其功能涉及神经元发育、生殖等重要生理作用，但具体、详尽的研究报告不多。鉴于目前尚无针对小鼠Doppel蛋白的特异性抗体，因此制备相关抗体对于深入开展小鼠和人Doppel功能研究意义重大。

发明内容

本发明的目的在于提供特异性识别小鼠(Mus musculus)Doppel蛋白的单克隆抗体，并获得该单克隆抗体重链可变区基因序列以及该基因编码的氨基酸序列。

本发明是通过以下技术方案来实现：

本发明公开了一种特异性识别小鼠Doppel蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体能够与天然鼠脑和原核细胞表达的Doppel结合，特异性识别Doppel蛋白的82～90位氨基酸残基，该82～90位氨基酸残基的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选地，所述单克隆抗体包括两株，分别为抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1A9和抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1D6，抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1A9和抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1D6的重链均为IgG1亚类，轻链均为κ型。

优选地，抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1A9和抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1D6的重链可变区DNA序列同源性为99％，氨基酸序列相同，相对亲和力不同。

进一步优选地，所述抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1A9的相对亲和力为1×10⁵；所述抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1D6的相对亲和力为1×10⁴。

进一步优选地，所述抗小鼠Doppel蛋白单克隆抗体1A9的重链可变区基因序列的3个互补决定区(CDR)分别为：

CDR1：GGTTATACCTTCACAGACTATGCA

CDR2：ATAAACACTGCGACTGGTGAGCCA

CDR3：GCTAGTGATGGTCGCTACTGGTACTTCGGTGTC；

对应的氨基酸序列分别为：

CDR1：Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asp-Tyr–Ala

CDR2：Ile-Asn-Thr-Ala-Thr-Gly-Glu-Pro