[发明专利]一种提高庆大霉素B发酵产量的方法

权利要求书

1.一种提高庆大霉素B发酵产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：将庆大霉素B产生菌接种于斜面培养基，35～38℃下培养5～7天；

步骤(2)：挑选成熟的庆大霉素B产生菌斜面接种于摇瓶培养基，在摇床上进行培养，35～38℃，210～230rmp下培养45～55h，并接种于一级种子罐的一级种子培养基上，33～37℃下，培养45～55h，然后移种于二级种子罐的二级种子培养基上，33～37℃下，培养20～28h；

步骤(3)：接种于发酵罐的发酵培养基上，33～37℃下进行发酵，罐压0.03～0.05Mpa，通气量为1:0.5～1:1.5vvm；发酵进行至20～30h补加无机盐溶液，发酵进行至40～50h再次补加无机盐溶液，发酵进行至60～70h进行补料培养，通过改变转速的方式维持发酵罐内的溶解氧浓度保持在设定值之上，对发酵液采用上柱解析、浓缩冻干，制得庆大霉素B。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的斜面培养基的组成为：玉米淀粉1.8～2.2g/L，KNO₃0.05～0.15g/L，NaCl0.04～0.06g/L，MgSO₄0.03～0.07g/L，K₂HPO₄0.02～0.04g/L，小麦粉1.8～2.2g/L，CaCO₃0.09～0.11g/L，琼脂1.7～2.3g/L，余量为水，所述斜面培养基pH为7。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的摇瓶培养基的组成为：淀粉1.8～2.2g/L，黄豆饼粉1.8～2.2g/L，葡萄糖0.4～0.6g/L，玉米粉0.3～0.7g/L，蛋白胨0.1～0.3g/L，KNO₃0.04～0.06g/L，K₂HPO₄0.01～0.03g/L，CaCO₃0.3～0.5g/L，余量为水，所述摇瓶培养基pH为7。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述摇瓶培养基的接种量为10～15％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述一级种子培养基的组成为：淀粉0.8～1.2g/L，黄豆饼粉1.4～1.6g/L，玉米粉0.8～1.2g/L，KNO₃0.04～0.06g/L，蛋白胨0.1～0.3g/L，聚醚0.03～0.05g/L，CaCO₃0.3～0.5g/L，余量为水，所述一级种子培养基pH为8.0～8.4；

所述二级种子培养基的组成为：淀粉1.8～2.2g/L，黄豆饼粉1.4～1.6g/L，玉米粉0.4～0.6g/L，葡萄糖0.4～0.6g/L，蛋白胨0.1～0.3g/L，KNO₃0.05～0.15g/L，聚醚0.03～0.05g/L，余量为水，所述二级种子培养基pH为8.0～8.4。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的组成为：淀粉3.8～4.2g/L，黄豆饼粉3.3～3.7g/L，葡萄糖0.4～0.6g/L，玉米粉1.4～1.6g/L，蛋白胨0.1～0.3g/L，KNO₃0.05～0.15g/L，(NH₄)₂SO₄0.04～0.06g/L，聚醚0.03～0.05g/L，CaCO₃0.3～0.5g/L，余量为水，所述发酵培养基pH为5.0～5.4。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的无机盐溶液选自氯化钠溶液、氯化钾溶液、硫酸镁溶液或者硫酸锌溶液。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中无机盐溶液的添加量为发酵液体积的0.05～0.5％。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，发酵罐罐压0.02～0.04MPa，发酵培养120～168h。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，发酵罐内初始的溶解氧浓度为100％，初始转速设定为180～220rpm；当发酵罐中的溶解氧浓度低于25％时，提高搅拌转速以控制溶解氧浓度；当发酵罐内的溶解氧浓度高于100％时，降低搅拌转速以控制溶解氧浓度。