[发明专利]一种酶法制备头孢克洛的方法

权利要求书

1.一种酶法制备头孢克洛的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）用弱碱性溶液将7-氨基-3-氯-头孢烯酸溶解得到母核溶液，在母核溶液中加入D-对苯甘氨酸甲酯盐酸盐溶液得到反应液，调节反应液的pH为6.4-6.6，反应温度为14-16℃后，再加入固定化头孢克洛合成酶，搅拌反应18-20分钟后加入头孢克洛晶种，30min后向反应液持续滴加D-对苯甘氨酸甲酯盐酸盐溶液2h，滴加速度为0.8-1.2mL/min，反应得到含有固定化头孢克洛合成酶与固体头孢克洛粗产物的混合液a，其中，持续控制反应液的pH为6.4-6.6，并保持反应温度为14-16℃直至7-氨基-3-氯-头孢烯酸的转化率大于98.5%；所述母核溶液中7-氨基-3-氯-头孢烯酸的质量分数为15%-17%，所述D-对苯甘氨酸甲酯盐酸盐溶液中D-对苯甘氨酸甲酯盐酸盐的质量分数为30%-50%，所述母核溶液中加入的D-对苯甘氨酸甲酯盐酸盐的量与母核溶液中7-氨基-3-氯-头孢烯酸的摩尔比为1:1.1-1:1.2，所述7-氨基-3-氯-头孢烯酸与加入的固定化头孢克洛合成酶的质量比为0.9-1:1，所述头孢克洛晶种的加入质量为7-氨基-3-氯-头孢烯酸质量的0.1%-0.3%；

（2）将步骤（1）中得到的混合液a，经筛网分离得到固定化头孢克洛合成酶和含有头孢克洛粗粉的混合液b，抽滤混合液b得到清液a与头孢克洛粗粉；

（3）将头孢克洛粗粉溶解、脱色后加入头孢克洛晶种调节pH后第一次搅拌养晶，再调节pH后第二次搅拌养晶得到晶体混合液，晶体混合液抽滤得到晶体产物与结晶母液，晶体产物再依次经水洗、泡洗、抽滤、真空干燥后得到头孢克洛；

所述结晶母液经回收处理，具体方法如下：a.将晶体产物用水洗涤两次分别得到第一次水洗液与第二次水洗液，合并结晶母液及第一次水洗液，再滴加β-萘酚溶液，滴加完成后在4-6℃下搅拌1小时，抽滤收集得到头孢克洛萘酚的络合物a；b.向第二次水洗液中加入N,N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷，再在搅拌下向第二次水洗液中加入络合物a，快速调节pH至0.9-1.1，搅拌至澄清，静置分相；c.向分相后得到的上清液c中加入二氯甲烷，搅拌静置分相后分离得到上清液d，上清液d返回用于溶解头孢克洛粗粉；

所述β-萘酚溶液为将β-萘酚溶于丙酮溶液中所得到的溶液，所述丙酮的质量为β-萘酚质量的8-10倍，所述β-萘酚溶液的滴加量为以保证β-萘酚的质量为结晶母液及第一次水洗液中头孢克洛质量的19%-21%为准，所述N,N-二甲基甲酰胺的加入量为第二次水洗液体积的3.5%-4.0%，所述二氯甲烷加入量为第二次水洗液体积的18.5%-20%。

2.根据权利要求1所述的酶法制备头孢克洛的方法，其特征在于，加入头孢克洛晶种之前，保持溶液温度为15℃-20℃，并调节溶液pH为1.0。

3.根据权利要求1所述的酶法制备头孢克洛的方法，其特征在于，所述第一次搅拌养晶时调节pH为1.5后在5℃-10℃下搅拌养晶30-60min，所述第二次搅拌养晶时缓慢调节pH为4.5后在0℃-5℃下搅拌养晶1-2小时。

4.根据权利要求1所述的酶法制备头孢克洛的方法，其特征在于，所述步骤（2）中得到的固定化头孢克洛合成酶经清液a洗涤，再过筛、抽滤，重复上述操作直至过筛、抽滤后的清液a变澄清，过滤清液a得到清液b。

5.根据权利要求4所述的酶法制备头孢克洛的方法，其特征在于，所述头孢克洛粗粉溶解时为将头孢克洛粗粉加入清液b中溶解。