[发明专利]一种荧光定量PCR技术检测意大利蜜蜂王浆主蛋白MRJP 2基因表达的方法

权利要求书

1.一种荧光定量PCR技术检测意大利蜜蜂王浆主蛋白MRJP 2基因表达的方法，其特征在于，按如下步骤进行：

（1）使用下述引物进行该基因的检测：

符合荧光RT-PCR反应特点的该序列特异上下游引物：

MRJP 2-F：5'- TCGCTTCTCACGGTTTGTATT-3'

MRJP 2-R：5'- AGTGATTGATGCTCGTTCCAG-3'

（2）总RNA的提取：采用各种通用的RNA提取方法，从意大利蜜蜂成体中提取总RNA；

（3）cDNA合成：以意大利蜜蜂总RNA为模板合成cDNA，反应体系为20 μL；

（4）实时荧光RT-PCR：以上述合成的cDNA为模板，上述（1）中MRJP 2-F和MRJP 2-R、β-actin –F：ATGCCAACACTGTCCTTTCTGG和β-actin –R：GACCCACCAATCCATACGGA为特异性引物，进行实时荧光RT-PCR扩增反应，每个样品设3个平行管，扩增后所得3个平行管的Ct值取平均数；

（5）意大利蜜蜂在苯菌灵饲喂前后MRJP 2基因相对表达量计算：实时荧光RT-PCR后，当目的基因与内参基因的扩增效率相近时，采用2－ΔΔCT法计算抗生素苯菌灵处理前后MRJP 2基因的相对表达量。

2.根据权利要求1所述荧光定量PCR技术检测意大利蜜蜂王浆主蛋白MRJP 2基因表达的方法，其特征在于，其中每条引物分别配制成浓度为10 μmol/L的贮存液，工作浓度为0.2μmol/L。

3. 根据权利要求2所述荧光定量PCR技术检测意大利蜜蜂王浆主蛋白MRJP 2基因表达的方法，其特征在于，实时荧光RT-PCR后，当目的基因与内参基因的扩增效率相近时，采用2－ΔΔCT法计算MRJP 2基因的相对表达量，且荧光RT-PCR技术检测意大利蜜蜂MRJP 2基因在苯菌灵胁迫下相较于正常情况下呈现出表达差异。