[发明专利]一种筛检细菌的方法及采用特征元素筛检六种致病菌的方法

说明书

技术领域

本发明属于细菌筛检技术领域，具体的说，涉及一种筛检细菌的方法及采用特征元素筛检六种致病菌的方法。

背景技术

传统意义上来说，细菌的检测由最初的显微镜镜下形态分析和动物实验，过渡到各种生化反应的鉴别实验，鉴别的特异性显著提高。随着检测设备的发展，细菌鉴定仪和PCR技术的使用，使得细菌的鉴定速度显著提升。

其中细菌鉴定仪是通过不同细菌有不同的生化反应，从而导致鉴定卡上颜色的变化，对照现有的谱图进行鉴别。虽然细菌鉴定仪的优点是能更方便的进行药敏实验，但其最大的缺点是完全不能受杂菌的干扰，不管是在培养阶段还是在鉴定阶段，一旦实验过程中被杂菌所污染，杂菌就会导致生化反应异常，可能造成结果的误判。

而PCR法进行检测对场地的要求比较高，虽然用荧光定量PCR可以避免后期的电泳阶段，但前期提取核酸阶段不但操作繁琐，而且容易污染实验室。PCR法检测需要找到对应的引物，但现在被研究出来公认的引物数量比较少，这也极大的限制了该仪器的应用。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种筛检细菌的方法及采用特征元素筛检六种致病菌的方法，通过分析各细菌的无机元素含量，找出其中的特征元素，从而达到快速筛查细菌的目的。

本发明目的是这样实现的：一种筛检细菌的方法，其关键在于：通过检测细菌中的特征元素，从而实现细菌的快速筛查和鉴别。

进一步地，上述的一种筛检细菌的方法：通过一种或多种所述特征元素对细菌进行鉴别、筛查。

进一步地，上述的一种筛检细菌的方法的具体步骤为：将已知细菌接种培养后，再将细菌消解、定容，通过电感耦合等离子体质谱仪检测细菌中常见无机元素的含量，然后对各种细菌中元素的含量进行对比区分，含量明显区别于其他菌的元素选为特征元素，最后将待测细菌进行接种培养后再将细菌消解、定容，并通过电感耦合等离子体质谱仪检测待测细菌中特征元素的含量进行细菌的筛查和鉴别。

进一步地，上述已知菌株和待测菌株的接种培养具体步骤为：将菌株的雌株接种于营养肉汤中，37℃震荡培养24h，12000r/min离心3min，弃去上清液，用超纯水反复洗涤三次后，将菌残渣放置于-70℃过夜，然后将其置于冷冻离心机中-40℃，抽取36h备用。培养处理中仍需要增菌，洗涤、冷冻干燥后方能够进行上机检测，其主要目的是去除菌落中的水分，从而使得不同细菌在相同的状态下进行比较。还有震荡培养不但可以使氧气充分融入培养基，而且可以有效的避免菌量增多后结成块状沉积于培养基底部。从而满足实验对细菌的产量的要求。

进一步地，上述已知菌株和待测菌株消解的具体步骤为：将菌体移入聚四氟乙烯罐中，加入2.0ml硝酸，1.0ml过氧化氢，超纯水2.0ml，混匀，浸泡30min，将聚四氟乙烯罐放入微波消解仪中，180℃消解20min。

进一步地，上述常见无机元素包括Na、K、Mg、Al、Ca、Fe、Zn、B、Mn、Cu、As、Se、Mo、Cd、Ba、Pb、Th、U、Be、V、Cr、Co、Ni、Ag、Sn、Sb、Hg、Tl。

本发明目的是这样实现的：一种采用特征元素筛检六种致病菌的方法，其关键在于：将金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌、副溶血弧菌和蜡样芽孢杆菌接种培养后，再将细菌消解、定容，通过电感耦合等离子体质谱仪检测细菌中28种无机元素的含量，即Na、K、Mg、Al、Ca、Fe、Zn、B、Mn、Cu、As、Se、Mo、Cd、Ba、Pb、Th、U、Be、V、Cr、Co、Ni、Ag、Sn、Sb、Hg和Tl，然后对六种细菌中所述无机元素的含量进行对比区分，其中含量明显区别于其他菌的元素选为特征元素，最后将待测细菌进行接种培养后再将细菌消解、定容，并通过电感耦合等离子体质谱仪检测待测细菌中特征元素的含量进行细菌的筛查和鉴别。

进一步地，上述已知菌株和待测菌株的接种培养具体步骤为：将菌株的雌株接种于营养肉汤中，37℃震荡培养24h，12000r/min离心3min，弃去上清液，用超纯水反复洗涤三次后，将菌残渣放置于-70℃过夜，然后将其置于冷冻离心机中-40℃，抽取36h备用。

进一步地，上述已知菌株和待测菌株消解的具体步骤为：将菌体移入聚四氟乙烯罐中，加入2.0ml硝酸，1.0ml过氧化氢，超纯水2.0ml，混匀，浸泡30min，将聚四氟乙烯罐放入微波消解仪中，180℃消解20min。

有益效果：