[发明专利]一种诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导培养基及诱导方法

说明书

本发明提供了一种诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导培养基，所述诱导培养基包括以下浓度的各组分：腺嘌呤150‑250mmol/l、FGF‑2 4‑8ng/ml、谷氨酰胺1‑4mmol/ml、氢化可的松0.2‑0.5μg/ml、胰岛素8‑12μg/ml、转铁蛋白80‑150μg/ml、亚硒酸钠8‑12ng/ml。本发明所述诱导培养基是在Williams E培养基的基础上通过添加一些特定的细胞因子和补充物从而提高诱导多能干细胞(ips)向毛乳头细胞分化的概率，为皮肤组织工程提供种子细胞来源。另外，本发明提供一种将诱导多能干细胞诱导形成毛乳头细胞的诱导方法，所述方法是将诱导多能干细胞的拟胚体接种于诱导培养基中进行诱导培养而形成毛乳头细胞。

技术领域

本发明涉及一种诱导培养基和诱导方法，具体涉及一种诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导培养基和诱导方法。

背景技术

皮肤组织工程是近几年的研究热点，但是皮肤的相关细胞都属于终末分化细胞，很难再体外进行大规模的培养扩增，种子细胞来源问题阻碍了组织工程的发展，自体的种子细胞来源有限，异体的种子细胞存在排斥反应，干细胞又存在伦理问题，因此从尿液中收集尿液细胞，将尿液细胞诱导成为IPS细胞，ips细胞再诱导成为角质形成细胞、成纤维细胞、汗腺细胞、毛乳头细胞等即可解决皮肤组织工程的种子来源问题，从尿液中获得细胞，方便快捷，不用通过创伤获取，来源广泛。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供了一种诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导培养基和诱导方法。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：一种诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导培养基，所述诱导培养基包括以下浓度的各组分：

其中FGF-2为成纤维生长因子-2。

本发明所述的诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导培养基可以高效诱导多能性干细胞分化为毛乳头细胞，同时整个过程没有用到血清，有效的避免了动物源性病原体带来的风险，提高了临床应用的安全性。

优选地，所述的诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导培养基，包括以下浓度的各组分：

采用上述所述的诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导培养基及诱导方法可以最大程度、最高效地诱导多能性干细胞分化为毛乳头细胞。

优选地，所述诱导培养基还包括基础培养液，所述基础培养液为Williams E。

本发明诱导培养基是在Williams E培养基的基础上通过添加一些特定的细胞因子和补充物从而提高诱导多能干细胞(ips)向毛乳头细胞分化的概率，为皮肤组织工程提供种子细胞来源。

另外，本发明提供了一种诱导多能干细胞形成毛乳头细胞的诱导方法，所述方法是将诱导多能干细胞的拟胚体接种于上述所述的诱导培养基中进行诱导培养的。

优选地，所述诱导培养温度为25～28℃。

优选地，所述诱导培养时间为6～10天。

优选地，所述诱导培养时间为8天。

优选地，所述拟胚体的获得方法为将单个复苏的诱导多能干细胞接种于含有拟胚形成培养基中，离心之后放入培养箱中培养48h后，即形成拟胚体。

优选地，所述单个复苏的诱导多能干细胞的接种量为1×10⁶个细胞/孔。

优选地，所述培养板离心的参数条件为：700r/min，5min。

优选地，所述培养箱的温度为37℃、二氧化碳含量为5％CO₂。