[发明专利]蜡样芽孢杆菌固体发酵方法及其发酵产物和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，具体而言，涉及一种蜡样芽孢杆菌固体发酵方法及其发酵产物和应用。

背景技术

蜡样芽孢杆菌是芽胞杆菌属中的一种。菌体细胞杆状，末端方，成短或长链，1.0～1.2×3.0～5.0微米，产芽孢，芽孢圆形或柱形，中生或近中生，1.0～1.5微米，孢囊无明显膨大，革兰氏阳性，无荚膜，运动，菌落大，表面粗糙，扁平，不规则。蜡样芽孢杆菌的菌落形态：在普通琼脂平板培养基上，37℃，培养24h，可形成圆形或近似圆形、质地软、无色素、稍有光泽的白色菌落直径5-7mm。蜡样芽孢杆菌在M.S.P培养基上生长更旺盛，菌落直径达8-10mm，质地更软，挑起来呈丝状，培养时间稍长，菌落表面呈毛玻璃状，并产生红色色素。蜡样芽孢杆菌在蛋白胨酵母膏平板上菌落为灰白色，不透明，表面较粗糙，似毛玻璃状或融蜡状，菌落较大。

有益蜡样芽孢杆菌是我国农业部正式批准生产生物制品的菌种，具有调节宿主微生态平衡的功能，广泛应用于饲料、农业、医药保健和食品等各领域。

目前对于蜡样芽孢杆菌的发酵方式主要为液体发酵，这种发酵方式普遍存在活菌数和芽孢率偏低的问题，没有芽孢的菌体会在短时间内死亡，大大降低菌剂的活性和质量稳定性。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，该发酵方法采用高密度固体发酵培养蜡样芽孢杆菌，能促进蜡样芽孢杆菌的生长，提高蜡样芽孢杆菌的活菌数量和芽孢产率。

本发明的目的之二在于提供一种所述蜡样芽孢杆菌固体发酵方法得到的蜡样芽孢杆菌固体发酵产物，该发酵产物中活菌数高、杂菌率低、芽孢率高，具有高效防治植物根结线虫的功能。

本发明的目的之三在于提供一种所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵产物在制备农业生物防治制剂和防治植物土传病害中的应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，包括以下步骤：

将蜡样芽孢杆菌菌株经种子活化和液体种子培养后，采用固体培养基进行发酵培养，得到发酵产物；

所述固体培养基的组分包括：40～60重量份蘑菇渣、10～30重量份稻壳、15～35重量份麸皮和2～8重量份玉米浆，pH值为6.5～7.5。

优选地，在本发明提供的技术方案的基础上，上述蜡样芽孢杆菌固体发酵方法包括以下步骤：

(a)斜面种子活化：将蜡样芽孢杆菌菌株在无菌条件下接种于营养琼脂斜面培养基上，培养温度37±1℃，培养时间36～48h，得到斜面种子；

(b)液体种子培养：将步骤(a)得到的斜面种子接种于液体培养基中，培养温度37±1℃，培养时间36～48h，得到液体种子；

(c)固体发酵培养：将步骤(b)得到的液体种子接种于固体培养基中，培养温度37±1℃，培养时间48～72h，得到发酵产物；

(d)将步骤(c)得到的发酵产物干燥后，得到干燥的发酵产物。

进一步，在本发明提供的技术方案的基础上，步骤(a)中营养琼脂斜面培养基的组分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠和20g/L琼脂，pH值为7.0～7.2。

进一步，在本发明提供的技术方案的基础上，步骤(b)中液体培养基的组分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨和5g/L氯化钠，pH值为7.0～7.2。

进一步，在本发明提供的技术方案的基础上，步骤(c)中液体种子的接种量为8～12％(v/w)。

进一步，在本发明提供的技术方案的基础上，步骤(c)中固体培养基为浅盘湿固体培养基，所述浅盘湿固体培养基为将固体培养基的组分放入浅盘内加水得到，浅盘湿固体培养基的水含量为55～65％。

优选地，在本发明提供的技术方案的基础上，步骤(d)中干燥具体包括：将步骤(c)得到的发酵产物烘干至含水率小于20％。

优选地，在本发明提供的技术方案的基础上，所述营养琼脂斜面培养基、液体培养基和固体培养基均独立地在使用前进行灭菌处理，灭菌条件为121℃、0.11MPa灭菌20～60min。

优选地，在本发明提供的技术方案的基础上，上述蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，包括以下步骤：

(a)斜面种子活化：将蜡样芽孢杆菌菌株在无菌条件下接种于经121℃、0.11MPa灭菌20min的营养琼脂斜面培养基上，培养温度37℃，培养时间36～48h，得到斜面种子；