[发明专利]蜡样芽孢杆菌固体发酵方法及其发酵产物和应用

权利要求书

1.一种蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

将蜡样芽孢杆菌菌株经种子活化和液体种子培养后，采用固体培养基进行发酵培养，得到发酵产物；

所述固体培养基的组分包括：40～60重量份蘑菇渣、10～30重量份稻壳、15～35重量份麸皮和2～8重量份玉米浆，pH值为6.5～7.5。

2.按照权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)斜面种子活化：将蜡样芽孢杆菌菌株在无菌条件下接种于营养琼脂斜面培养基上，培养温度37±1℃，培养时间36～48h，得到斜面种子；

(b)液体种子培养：将步骤(a)得到的斜面种子接种于液体培养基中，培养温度37±1℃，培养时间36～48h，得到液体种子；

(c)固体发酵培养：将步骤(b)得到的液体种子接种于固体培养基中，培养温度37±1℃，培养时间48～72h，得到发酵产物；

(d)将步骤(c)得到的发酵产物干燥后，得到干燥的发酵产物。

3.按照权利要求2所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，其特征在于，步骤(a)中营养琼脂斜面培养基的组分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠和20g/L琼脂，pH值为7.0～7.2；

优选地，步骤(b)中液体培养基的组分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨和5g/L氯化钠，pH值为7.0～7.2。

4.按照权利要求2或3所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，其特征在于，步骤(c)中液体种子的接种量为8～12％(v/w)。

5.按照权利要求2或3所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，其特征在于，步骤(c)中固体培养基为浅盘湿固体培养基，所述浅盘湿固体培养基为将固体培养基的组分放入浅盘内加水得到，浅盘湿固体培养基的水含量为55～65％。

6.按照权利要求2或3所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，其特征在于，步骤(d)中干燥具体包括：将步骤(c)得到的发酵产物烘干至含水率小于20％。

7.按照权利要求2或3所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，其特征在于，所述营养琼脂斜面培养基、液体培养基和固体培养基均独立地在使用前进行灭菌处理，灭菌条件为121℃、0.11MPa灭菌20～60min。

8.按照权利要求2或3所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)斜面种子活化：将蜡样芽孢杆菌菌株在无菌条件下接种于经121℃、0.11MPa灭菌20min的营养琼脂斜面培养基上，培养温度37℃，培养时间36～48h，得到斜面种子；

所述营养琼脂斜面培养基的组分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠和20g/L琼脂，pH值为7.0～7.2；

(b)液体种子培养：挑取步骤(a)得到的斜面种子两环接种于1000L液体发酵罐中的经121℃、0.11MPa灭菌30min的液体培养基中，培养温度37℃，培养时间36～48h，得到液体种子；

所述液体培养基的组分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨和5g/L氯化钠，pH值为7.0～7.2；

(c)固体发酵培养：将经121℃、0.11MPa灭菌60min的固体培养基的组分放入浅盘内，加水得到浅盘湿固体培养基，浅盘湿固体培养基水含量60％；将步骤(b)得到的液体种子以10％(v/w)的接种量接种于浅盘湿固体培养基中，搅拌均匀，培养温度37℃，培养时间48～72h，得到发酵产物；

所述固体培养基的组分包括：50重量份蘑菇渣、20重量份稻壳、25重量份麸皮和5重量份玉米浆，pH值为6.5～7.5；

(d)将步骤(c)得到的发酵产物置于50～80℃条件下烘干，期间取样测定水分，当含水率低于20％时，烘干结束，得到干燥的发酵产物。

9.一种蜡样芽孢杆菌固体发酵产物，其特征在于，按照权利要求1-8任一项所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵方法得到。

10.一种按照权利要求9所述的蜡样芽孢杆菌固体发酵产物在制备农业生物防治制剂和防治植物土传病害中的应用。