[发明专利]肿瘤免疫治疗中微卫星不稳定状态分析体系

权利要求书

1.作为用于肿瘤免疫治疗(PD-1/PD-L1)的辅助诊断标志物检测的微卫星不稳定状态分析体系，该体系所用的扩增引物组合能够同时扩增单核苷酸重复位点(NR-21、NR-24、BAT-25、BAT-26、MONO27)和五核苷酸重复位点(Penta C和Penta D)，所述的每一个位点均由一对引物扩增，这7个扩增引物对分别为：

NR-21引物：

上游引物：GGAGTCGCTGGCACAGTTCTAT，

下游引物：CTTTCTGGTCACTCGCGTTTAC；

NR-24引物：

上游引物：CCCCATTGCTGAATTTTACCTC，

下游引物：GAGATTGTGCCATTGCATTCC；

BAT-25引物：

上游引物：CTCGCCTCCAAGAATGTAAGTG，

下游引物：GACATTCTGCATTTTAACTATGGCTC；

BAT-26引物：

上游引物：GAAATTGGATATTGCAGCAGTCAG，

下游引物：GCTCCTTTATAAGCTTCTTCAGTATATGTC；

MONO-27引物：

上游引物：GCAGGGAAATGGTGGGAACC，

下游引物：AGGGTGGATCAAATTTCACTTGG；

Penta C引物：

上游引物：GAGCTGGAGGTTGCATTCAG，

下游引物：TGAGCTACAATGGTTATCACCTG；

Penta D引物：

上游引物：GGAAGGTCGAAGCTGAAGTGAG，

下游引物：TTGCCTAACCTATGGTCATAACG。

2.根据权利要求1所述的扩增引物组合，所述扩增引物的扩增位点分别由三种不同的荧光染料标记，三组组合分别为：第一组：NR-21、BAT-25、MONO-27；第二组：NR-24、Penta C；第三组：BAT-26、Penta D。

3.根据权利要求1和2所述的扩增引物组合，三组组合分别标记JOE、TAM、FAM。

4.根据权利要求3所述的扩增引物标记，所述的第一组NR-21、BAT-25、MONO-27每个位点都标记JOE；所述的第二组NR-24、Penta C每个位点都标记TAM；所述的第三组BAT-26、Penta D每个位点都标记FAM。

5.根据权利要求4所述的扩增引物组合物，所述的每个位点的引物对中，上游引物的5′-OH末端标记荧光，下游引物不标记。

6.根据权利要求5所述的扩增体系，所述扩增体系的总体积为10μl，其中缓冲液1μl，MgCl₂0.4μl，dNTPs 0.8μl，10×引物混合物1.0μl，热启动Taq酶0.2μl，SSB 0.08μl，模板2μl，去离子水4.52μl。

7.根据权利要求6所述的扩增体系，10×引物混合物中的引物浓度分别为2μM的NR-21、2μM的NR-24、2μM的BAT-25、2μM的BAT-26、2μM的MONO-27、2μM的Penta C和2μM的Penta D。