[发明专利]雷公藤焦磷酸合酶TwCPS4及其制备松香烷型二萜化合物的应用

权利要求书

1.雷公藤柯巴基焦磷酸合酶TwCPS4或其基因与丹参贝壳烯合酶SmKSL1或其基因在提高二萜类化合物次丹参酮二烯产量中的用途，所述雷公藤柯巴基焦磷酸合酶TwCPS4的氨基酸序列由SEQ ID NO：1所示。

2.如权利要求1所述用途，其特征在于所述雷公藤柯巴基焦磷酸合酶TwCPS4的基因，其核苷酸序列由SEQ ID NO：2所示。

3.如权利要求1或2所述用途，其特征在于先使用雷公藤柯巴基焦磷酸合酶TwCPS4以GGPP为底物催化产生CPP，再使用丹参贝壳烯合酶SmKSL1催化CPP合成松香烷型二萜类化合物前体次丹参酮二烯。

4.一种提高松香烷型二萜类化合物前体次丹参酮二烯产量的方法，其包括：

(1)将雷公藤柯巴基焦磷酸合酶TwCPS4的编码基因表达盒插入原核表达载体中，制备表达外源雷公藤柯巴基焦磷酸合酶TwCPS4的重组大肠杆菌，超声破碎菌体，取含有重组TwCPS4蛋白的上清液；

(2)将丹参贝壳烯合酶SmKSL1的编码基因表达盒插入原核表达载体中，制备表达外源丹参贝壳烯合酶SmKSL1的重组大肠杆菌，超声破碎菌体，取含有重组SmKSL1蛋白的上清液；

(3)以GGPP为底物，以步骤(1)中获得的含重组TwCPS4蛋白的上清液为催化剂，催化GGPP产生CPP；

(4)以步骤(3)获得的CPP为底物，以步骤(2)获得的含重组SmKSL1蛋白的上清液为催化剂，催化CPP产生松香烷型二萜类化合物前体次丹参酮二烯；

其中，所述雷公藤柯巴基焦磷酸合酶TwCPS4的氨基酸序列由SEQ ID NO：1所示。

5.如权利要求4所述提高松香烷型二萜类化合物前体次丹参酮二烯产量的方法，步骤(1)所述的原核表达载体为pMAL-c2X，所述TwCPS4基因插入BamH I和Sal I之间。

6.如权利要求4所述提高松香烷型二萜类化合物前体次丹参酮二烯产量的方法，在步骤(3)的催化反应完成后还包括正己烷萃取、脱磷的步骤。

7.如权利要求4所述提高松香烷型二萜类化合物前体次丹参酮二烯产量的方法，在步骤(4)完成后还包括对反应产物进行GC-MS分析的步骤，其中在第13.06分出现的峰为次丹参酮二烯。