[发明专利]一种单细胞全基因组的测序方法有效
申请号: | 201611126784.8 | 申请日: | 2016-12-09 |
公开(公告)号: | CN106591447B | 公开(公告)日: | 2020-06-12 |
发明(设计)人: | 陈昌岳;李静;甘广利;张祥林;杨飞;占雪峰;赵慧茹 | 申请(专利权)人: | 上海美吉医学检验有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6869 | 分类号: | C12Q1/6869;C12Q1/6806;G16B25/00;G16B20/00;G16B50/00 |
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地址: | 201321 上海市*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 单细胞 基因组 方法 | ||
1.一种单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:包括以下步骤:
对单细胞进行分离并裂解,得到该单细胞的全基因组DNA;
对单细胞的全基因组DNA进行单细胞全基因组扩增,得到全基因组扩增产物;
对扩增产物进行质量检测;
对检测合格的扩增产物进行捕获并构建DNA测序文库;
对建库后的数据进行高通量测序;
其中,对扩增产物进行质量检测包括步骤:检测该扩增产物中的DNA片段长度,将最大DNA片段的长度与预设值进行比较,判断扩增产物的质量是否合格,最大DNA片段的长度大于预设值的扩增产物,其质量检测合格;
所述预设值为10380bp,如果最大DNA片段的长度大于10380bp,扩增产物的质量合格。
2.根据权利要求1所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述将最大DNA片段的长度与预设值进行比较是指:以DNA片段长度为横坐标,DNA片段丰度为纵坐标建立曲线,通过比较尾峰位置的横坐标与预设值,判断扩增产物的质量是否合格。
3.根据权利要求1所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述检测扩增产物中的DNA片段长度时,向扩增产物中加入低片段标记物和高片段标记物,其中高片段标记物的长度与预设值相同。
4.根据权利要求1所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述扩增产物中DNA片段长度通过基于毛细管电泳的DNA分析芯片进行检测。
5.根据权利要求4所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述扩增产物中DNA片段长度利用安捷伦2100生物分析仪及相应的试剂盒进行检测,所述试剂盒中包含有基于毛细管电泳的DNA分析芯片。
6.根据权利要求5所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述扩增产物用无核酸酶水稀释至1~4ng/μL后再进行DNA片段长度的检测。
7.根据权利要求5所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:单细胞全基因组扩增后,利用磁珠纯化试剂盒或者切胶回收试剂盒对扩增产物进行分离回收,然后取部分扩增产物稀释后进行DNA片段长度的检测。
8.根据权利要求1所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述单细胞全基因组扩增采用MALBAC方法进行扩增。
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