[发明专利]一种单细胞全基因组的测序方法有效

专利信息
申请号: 201611126784.8 申请日: 2016-12-09
公开(公告)号: CN106591447B 公开(公告)日: 2020-06-12
发明(设计)人: 陈昌岳;李静;甘广利;张祥林;杨飞;占雪峰;赵慧茹 申请(专利权)人: 上海美吉医学检验有限公司
主分类号: C12Q1/6869 分类号: C12Q1/6869;C12Q1/6806;G16B25/00;G16B20/00;G16B50/00
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 201321 上海市*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 单细胞 基因组 方法
【权利要求书】:

1.一种单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:包括以下步骤:

对单细胞进行分离并裂解,得到该单细胞的全基因组DNA;

对单细胞的全基因组DNA进行单细胞全基因组扩增,得到全基因组扩增产物;

对扩增产物进行质量检测;

对检测合格的扩增产物进行捕获并构建DNA测序文库;

对建库后的数据进行高通量测序;

其中,对扩增产物进行质量检测包括步骤:检测该扩增产物中的DNA片段长度,将最大DNA片段的长度与预设值进行比较,判断扩增产物的质量是否合格,最大DNA片段的长度大于预设值的扩增产物,其质量检测合格;

所述预设值为10380bp,如果最大DNA片段的长度大于10380bp,扩增产物的质量合格。

2.根据权利要求1所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述将最大DNA片段的长度与预设值进行比较是指:以DNA片段长度为横坐标,DNA片段丰度为纵坐标建立曲线,通过比较尾峰位置的横坐标与预设值,判断扩增产物的质量是否合格。

3.根据权利要求1所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述检测扩增产物中的DNA片段长度时,向扩增产物中加入低片段标记物和高片段标记物,其中高片段标记物的长度与预设值相同。

4.根据权利要求1所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述扩增产物中DNA片段长度通过基于毛细管电泳的DNA分析芯片进行检测。

5.根据权利要求4所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述扩增产物中DNA片段长度利用安捷伦2100生物分析仪及相应的试剂盒进行检测,所述试剂盒中包含有基于毛细管电泳的DNA分析芯片。

6.根据权利要求5所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述扩增产物用无核酸酶水稀释至1~4ng/μL后再进行DNA片段长度的检测。

7.根据权利要求5所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:单细胞全基因组扩增后,利用磁珠纯化试剂盒或者切胶回收试剂盒对扩增产物进行分离回收,然后取部分扩增产物稀释后进行DNA片段长度的检测。

8.根据权利要求1所述单细胞全基因组的测序方法,其特征在于:所述单细胞全基因组扩增采用MALBAC方法进行扩增。

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