[发明专利]一种高表达Slit2D2-HSA蛋白的酵母细胞及应用

说明书

本发明提供了一种高表达Slit2D2‑HSA蛋白的酵母细胞及应用，具体地本发明公开了一种具有显著抗肿瘤活性的Slit2D2‑HAS融合蛋白，并且经过多重密码子优化获得了能够在酵母中高表达的Slit2D2‑HAS融合蛋白密码子序列。该经过优化的密码子序列能够在酵母细胞中高效表达。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地说，本发明涉及一种高表达Slit2D2-HSA蛋白的酵母细胞及应用。

背景技术

肿瘤是机体细胞异常生长造成的疾病，近30年来恶性肿瘤的发病率一直呈上升趋势。根据《世界癌症报告》，世界每年新增癌症病例有近一半出现在亚洲，其中大部分在中国，中国新增癌症病例高居第一位。中国新增癌症病例约占全球的20％，癌症死亡病例约占全球25％。根据《2015中国肿瘤登记年报》报告,中国每天新增肿瘤病例8550例,每分钟有6人诊断为癌症、有5人死于癌症,肺癌、胃癌、肝癌等实体瘤已成为发病与死亡率最高的癌症。肿瘤已然成为影响国民健康的重大类疾病，给患病家庭和社会带来沉重负担。

Robo是一次跨膜的受体蛋白,在哺乳动物中，已经克隆到4个Robo基因。从物种进化的角度看，Robo1,2,3的胞外部分非常的保守，从果蝇到人类都是由5个Ig样功能区和3个FibronectinIII型重复序列组成。Robos有很短的跨膜区域和一个较长的胞内区；按照序列的保守性，胞内区被划分为4个更小的区域，分别命名为：CC0,CC1,CC2,CC3。Robo4的结构与其它三个家族成员有很大的不同，它的胞外只有2个Ig样功能区和3个Fibronectin III型重复序列；胞内也只有CC0和CC2两个区域。Robos胞外的IgG domains被认为是与配体Slit结合所必需的，较长的胞内区域则和一些重要的信号分子相互作用，参与Slit/Robo下游的信号转导，从而完成刺激信号由细胞外部到内部骨架的传递。目前，已完成slit2与Robo相互作用区域蛋白质的机构解析，发现slit2的第二个结构域D2与Robo1的Ig1结合，进而启动信号传导。近年来发现Slit及其受体Robo调节肿瘤细胞的迁移、炎症细胞的迁移、血管内皮细胞的迁移，与肿瘤细胞及炎症疾病的发展密切相关。因此，有望基于Slit开发新的抗肿瘤药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高表达Slit2D2-HSA蛋白的酵母细胞及应用。

本发明的第一方面，提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白选自下组：

(A)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽；

(B)具有与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列≥80％同源性(优选地，≥90％的

同源性；等优选地≥95％的同源性；最优选地，≥97％的同源性)的多肽，

且所述多肽具有肿瘤抑制活性；

(C)将SEQ ID NO:1中任一所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、

缺失或添加而形成的，且保留肿瘤抑制活性的衍生多肽。

本发明的第二方面，提供了一种分离的经密码子优化的多核苷酸，所述多核苷酸编码本发明第一方面所述的融合蛋白；并且所述多核苷酸选自下组：

(a)序列如SEQ ID NO.2所示的多核苷酸；

(b)核苷酸序列与SEQ ID NO.2所示序列的同源性≥95％(较佳地≥98％)的多核苷酸；

(c)与(a)-(c)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。

本发明的第三方面，提供了一种表达载体，所述表达载体含有本发明第二方面所述的多核苷酸。

本发明的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有本发明第三方面所述的表达载体，或者在基因组中整合有本发明第二方面所述的多核苷酸。