[发明专利]T细胞抗原受体β链CDR3的处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种获取作为中间结果的围手术期肾脏移植受者信息，特别是涉及一种T细胞抗原受体β链CDR3的处理方法。

背景技术

肾脏移植是目前治疗慢性肾功能衰竭最有效的方法。随着慢性肾衰竭患者的增多，研究者们经过不断的探索，终于使肾移植成为了终末期肾病病人的最佳替代治疗方法。成功的肾移植可显著提高终末期肾病患者的生活质量。近年来，肾移植受者/移植肾的短期存活率明显得到改善，但受者/移植肾的长期存活率却没有进一步提高。Sellares等对美国移植研究数据库中不同时期的肾移植受者长期存活数据分析结果显示：与早期阶段(1982～1984年)相比，近年来(2005～2010年)肾移植的短期存活率已明显提高，而术后5年移植肾的存活率仍每年持续下降约3.6％。

目前排斥反应和感染是肾脏移植术后面临的两大问题。肾脏移植术后发生急性排斥反应是导致移植肾丢失的主要原因之一，发生率为20％-50％，其也是影响移植肾长期存活率和功能的独立危险因素。预防和减少早期急性排斥反应的发生有利于移植受者和移植物的长期存活。急性排斥反应跟很多因素有关，包括年龄、性别、透析时间、移植史、输血次数、女性的妊娠史、供体的冷、热缺血时间、配型、原发病、供体情况及免疫抑制方案等。

早期移植肾急性排斥反应的主要临床表现主要：①尿量减少；②发热，特别是中低热，一般常在下半夜和凌晨发生，常至午后退热，次日又再次出现，伴有感冒样全身症状；也没有明显的感染征象。③血压增高尤其是突然的血压升高且对降压药物反应较差者。④移植肾区肿胀触痛不适。患者一般自觉移植肾区胀痛、压痛，触诊可扪及肾脏比原来增大，质地变硬；⑤体重逐渐增加，因为尿少，体内水分未能排出导致的，严重者可出现明显水肿或腹水。⑥其他全 身症状如肌肉关节酸痛腹胀，纳差等。目前临床监测肾移植术后免疫状态的方法包括受体的全身情况、血肌酐、彩色多普勒超声、免疫抑制剂的血药浓度监测、移植物穿剌组织病理学检查等。但是血肌酐敏感度和特异性较差，对临床上的预防及治疗等意义不大；彩色多普勒超声受到超声诊断医生主观影响较大；较为普遍的是监测免疫抑制剂的血药浓度，但是由于不同受者的体内药物代谢存在着个体差异，且机体内多种因素都可以影响免疫抑制药物的血药浓度，许多术后患者仍不可避免排斥反应的发生；而移植物穿刺组织病理学检查是一种有创性检查，且只能反映移植肾穿刺局部的情况,对患者具有一定的风险性，存在并发症如出血、休克、动静脉瘘、血尿、无尿、移植肾破裂、甚至引起移植肾丢失等，不宜反复监测。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种围手术期肾移植受者T细胞抗原受体β链CDR3的处理方法。

一种T细胞抗原受体β链CDR3的处理方法，包括以下步骤：

设置实验组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的外周血标本；

分离各所述外周血标本的T细胞，并分别提取所述外周血标本T细胞中的DNA；

采用多重PCR技术，扩增出T细胞受体β链的CDR3区；

对所述T细胞受体β链的CDR3区进行高通量测序，对所述实验组及对照组中T细胞受体β链进行DNA分析。

在其中一个实施例中，采用多重PCR技术之前，所述处理方法还包括测定DNA的含量以及检测DNA完整性的步骤。

在其中一个实施例中，采用荧光分析法测定DNA的含量，用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA完整性。

在其中一个实施例中，利用Illumina MiSeq平台对CDR3区进行高通量测序。

在其中一个实施例中，采用多重PCR技术，扩增出T细胞受体β链的CDR3区，包括构建DNA文库，其具体包括：

计算所述实验组及对照组中DNA的取用量，称取，并加入V区引物及J区引物进行多重PCR；

电泳检测回收多重PCR产物；

加入末端修护混合液进行末端修护反应，并纯化；

将纯化后的产物在3’端连上A碱基；

在接头连接反应体系中进行接头连接；

通过PCR反应富集经过接头修饰的DNA片段，并对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，切取目的片段后，纯化回收，得到DNA文库。