[发明专利]T细胞抗原受体β链CDR3的处理方法

权利要求书

1.一种T细胞抗原受体β链CDR3的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

设置实验组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的外周血标本；

分离各所述外周血标本的T细胞，并分别提取所述外周血标本T细胞中的DNA；

采用多重PCR技术，扩增出T细胞受体β链的CDR3区；

对所述T细胞受体β链的CDR3区进行高通量测序，对所述实验组及对照组中T细胞受体β链进行DNA分析。

2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，采用多重PCR技术之前，所述处理方法还包括测定DNA的含量以及检测DNA完整性的步骤。

3.根据权利要求2所述的处理方法，其特征在于，采用荧光分析法测定DNA的含量，用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA完整性。

4.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，利用Illumina MiSeq平台对CDR3区进行高通量测序。

5.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，采用多重PCR技术，扩增出T细胞受体β链的CDR3区，包括构建DNA文库，其具体包括：

计算所述实验组及对照组中DNA的取用量，称取，并加入V区引物及J区引物进行多重PCR；

电泳检测回收多重PCR产物；

加入末端修护混合液进行末端修护反应，并纯化；

将纯化后的产物在3’端连上A碱基；

在接头连接反应体系中进行接头连接；

通过PCR反应富集经过接头修饰的DNA片段，并对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，切取目的片段后，纯化回收，得到DNA文库。

6.根据权利要求5所述的处理方法，其特征在于，所述V区引物包括TRBV2、TRBV3-1、TRBV4-1/2/3、TRBV5-1、TRBV5-4/5/6/8、TRBV6-4.1、 TRBV6-8/5/1.2、TRBV6-9/7/1.1/6、TRBV6-4.2、TRRBV6-2/3、TRBV7-2/4/6/7/8、TRBV7-3、TRBV7-9、TRBV9、TRBV10-1、TRBV10-2/3、TRBV11-1/2/3、TRBV12-3.2/5.2、TRBV12-3.1/4/5.1、TRBV13、TRBV14、TRBV15、TRBV16、TRBV18、TRBV19、TRBV20-1、TRBV24-1、TRBV25-1、TRBV27-1、TRBV28、TRBV29-1及TRBV30-F5。

7.根据权利要求5所述的处理方法，其特征在于，所述J区引物包括TRBJ1.1、TRBJ1.2、TRBJ1.3、TRBJ1.4、TRBJ1.5、TRBJ1.6、TRBJ2.1、TRBJ2.2、TRBJ2.3、TRBJ2.4、TRBJ2.5、TRBJ2.6及TRBJ2.7。

8.根据权利要求5所述的处理方法，其特征在于，构建DNA文库后，还包括检测所述DNA文库的插入片段范围及对所述DNA文库的浓度进行定量。

9.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，分离各所述外周血标本的T细胞包括：分离出所述外周血标本的淋巴细胞及分离出所述淋巴细胞中的T细胞。

10.根据权利要求9所述的处理方法，其特征在于，采用Ficoll密度梯度离心法分离出所述外周血标本的淋巴细胞。