[发明专利]含Boc侧链氨基保护的双保护赖氨酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽衍生物的合成领域，具体涉及一种含Boc侧链氨基保护的双保护赖氨酸（Fmoc-Lys(Boc)-OH）的合成工艺。

背景技术

赖氨酸是最常见的氨基酸之一，侧链含有一个氨基，因此是一种碱性氨基酸。侧链氨基具有较强的反应活性，因此在多肽合成中需要进行保护。Fmoc-L-Lys(Boc)-OH是一种常用的双保护赖氨酸，侧链氨基保护基则常用Boc。

该产品传统的制备工艺是利用 Cu⁺²或 9-BBN 为络合试剂对赖氨酸alpha-氨基和羧基进行保护，然后加入Boc酸酐对epsilon-氨基进行选择性保护，最后用硫化钠或者8-羟基喹啉等脱铜试剂除去铜或用三氟过氧乙酸等氧化剂除去 9-BBN，再利用Fmoc-OSU对alpha-氨基进行保护，得到所需产品。传统工艺脱铜试剂硫化钠或者8-羟基喹啉，硫化钠脱铜时会产生刺激性有毒气体，给安全环保造成较大压力。而8-羟基喹啉价格高，提高了原料成本。

发明内容

为了克服现有技术的上述技术缺点，本发明的目的是提供一种含Boc侧链氨基保护的双保护赖氨酸（Fmoc-Lys(Boc)-OH）的新型合成工艺。本发明的工艺将避免硫化钠脱铜时产生刺激性有毒气体，解决安全环保问题；同时解决因8-羟基喹啉价格高而造成的原料成本偏高的问题。

完成上述发明任务的技术方案是，一种含Boc侧链氨基保护的双保护赖氨酸（Fmoc-Lys(Boc)-OH）的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

用三氟化硼为络合剂，对赖氨酸alpha-氨基和羧基进行保护；

加入Boc酸酐对epsilon-氨基进行选择性保护；

然后用碱液除去硼络合物；

利用Fmoc-OSU（ 9-芴甲基琥珀酰亚氨基碳酸酯）对alpha-氨基进行保护，得到所需产品。

更具体和更优化地说，本发明的合成方法是：

⑴.将赖氨酸分散于四氢呋喃中；

⑵.冰浴搅拌下加入甲醇钠；

⑶.自然升温至室温搅拌1小时；

⑷.加入50%的三氟化硼四氢呋喃溶液；

⑸.缓慢升温至50度；

⑹.搅拌5小时至体系澄清；

⑺.加入二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液；

⑻.30%液碱控制pH为8左右至反应完全;

⑼.加入液碱；

⑽.冰浴搅拌半小时；

⑾.减压回收四氢呋喃，大量白色固体析出；

⑿.离心得中间体H-Lys(Boc)-OH湿品。

以上步骤⑴中，赖氨酸与四氢呋喃的重量-体积比是：1:5-1:1；最佳比例是1:2.05

以上步骤⑵中，赖氨酸与甲醇钠的摩尔比是：1:0.8-1:1.5；最佳比例是1:1.05

以上步骤⑷中，赖氨酸与三氟化硼的摩尔比是：1:0.9-1:2；最佳比例是1:1.5

以上步骤⑺中，赖氨酸与二碳酸二叔丁酯的摩尔比是：1:0.9-1:5；最佳比例是1:1.2

以上步骤⑼中，赖氨酸与30%液碱的重量比是：4:1-6:1；最佳比例是5.5:1；所述的液碱可以采用氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾，优先氢氧化钠。

进一步优化，可以增加以下步骤：

.所得的H-Lys(Boc)-OH 湿品中加水和乙酸乙酯；搅匀后用液碱调节pH至9；

.分批投入Fmoc-osu（ 9-芴甲基琥珀酰亚氨基碳酸酯）至反应完全，反应过程用液碱控制pH 9-10；

.反应结束后用工业盐酸调pH至3；

.分出乙酸乙酯层，乙酸乙酯层加饱和食盐水洗涤；

.无水硫酸钠干燥，抽滤，脱溶；

.加入甲叔醚打浆2小时；

.抽滤，固体晾干得HPLC分析产品含量大于99.5%。

以上步骤中，H-Lys(Boc)-OH折干重量与乙酸乙酯的重量比是：1:2-1:5；最佳比例是1:3.42；

以上步骤中的液碱，可以采用氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾，优先碳酸钾。；

以上步骤中，H-Lys(Boc)-OH折干重量与Fmoc-osu的摩尔比是：1:0.8-1:1.5；最佳比例是1:1.1；

以上步骤中，H-Lys(Boc)-OH折干重量与加入甲叔醚的重量比是：1:15-1:25；最佳比例是1:18。