[发明专利]miR‑135的用途及其相关药物

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及miR-135的用途及其相关药物。

背景技术

作为一类小的(18-25个核苷酸)非编码RNA，microRNA在各种生物的生命活动中，对基因的表达起着至关重要的调控作用。在哺乳动物中，超过1000种microRNA的序列已经被发现，每个microRNA可以调控多个信使RNA(mRNA),同时每个mRNA可以被成百上千个microRNA所调控。研究估计，超过60％的蛋白编码基因表达受microRNA的调控。

最近研究发现在肾脏疾病中，microRNA可以异常调节基因的表达。例如通过激活血管内皮生长因子，miR-93可促进肾小球的损伤；通过抑制BCL2的表达，miR-195能促进足细胞凋亡；通过下调miR-30可加速足细胞损伤。在糖尿病模型的系膜细胞中miR-192能促进胶原的形成和肾小管间质纤维化的形成；在糖尿病肾病实验模型中，miR-192、miR-216和miR-217可诱导肾脏系膜细胞肥大。Dicer是microRNA成熟过程中所必须的酶，在肾脏细胞中特异地敲除Dicer将能导致肾脏病变：如在足细胞中特异性地敲除Dicer将能诱导蛋白尿和肾小球硬化；敲除Dicer能减少肾小球细胞数目和减轻近曲小管缺血再灌注损伤。这些结果都证实了microRNA在肾脏疾病的发生发展中扮演了不可或缺的作用，但其中的具体机制还未得到深入研究。

miR-135家族在哺乳动物中高度保守，其家族成员包括两个即miR-135a和miR-135b。目前一些研究发现miR-135作为一种癌基因在肿瘤的发生发展中起着重要作用：如诱导直肠癌的发生；提高非小细胞肺癌对药物的抵抗；促进直肠癌的侵袭与生长。然而也有一些研究发现miR-135a作为一种抑癌基因抑制肿瘤的发生：如抑制肾癌细胞的增殖和选择性杀死恶性胶质瘤细胞。另外还有一些研究发现miR-135a能调节中脑的发育和促进糖尿病肾脏的纤维化。尽管目前有这么多关于miR-135的研究，但miR-135大部分功能还未被研究，特别是在肾脏疾病(例如足细胞疾病)中的作用。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供了miR-135的新用途，并将miR-135用于制备足细胞损伤诊断药物或制剂，还将miR-135用于诱导足细胞发生损伤，成功构建了足细胞损伤模型。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的第一方面，提供了一种分离的miR-135基因在制备足细胞损伤诊断药物或制剂中的用途。

所述将miR-135基因用于制备足细胞损伤诊断药物或制剂，是指将miR-135基因表达产物作为一项足细胞损伤诊断指标应用于足细胞诊断药物的制备。

研究发现：miR-135在损伤足细胞中的表达量显著高于正常足细胞。提示miR-135可能在足细胞损伤的发生发展中发挥重要作用；miR-135基因的表达水平可能成为足细胞损伤诊断的标志。

本发明的第二方面，提供了一种足细胞损伤诊断试剂盒，所述试剂盒包括：特异性扩增miR-135转录本的引物或特异性抗miR-135的抗体。

本发明的第三方面提供了miR-135在制备诱导足细胞发生损伤的药物或制剂中的用途。

优选地，所述足细胞发生损伤表现为足细胞中desmin和snail的表达水平上调。

优选地，所述足细胞发生损伤表现为足细胞中nephrin、WT1和E-cadherin的表达水平下调。

优选地，所述足细胞发生损伤表现为足细胞骨架减少或足细胞骨架的重排。

进一步地，所述药物或制剂通过表达miR-135起到诱导足细胞发生损伤的作用。

更进一步地，所述miR-135通过激活wnt信号通路起到诱导足细胞发生损伤的作用。

较佳地，所述miR-135能够激活wnt信号通路表现为miR-135激活Topflash活性。

较佳地，所述miR-135能够激活wnt信号通路表现为miR-135促进未磷酸化的有活性的β-catenin的表达。

较佳地，所述miR-135能够激活wnt信号通路表现为miR-135诱导β-catenin进入细胞核。

进一步优选地，所述miR-135通过抑制GSK3β的表达来起到激活wnt信号通路的作用。

较佳地，所述miR-135通过直接靶向GSK3β的3'UTR来抑制GSK3β的mRNA和蛋白表达水平。

本发明的第四方面，还提供了miR-135在构建足细胞损伤模型中的用途。