[发明专利]化妆品中12种禁用着色剂同时检测的方法

权利要求书

1.一种化妆品中14种禁用着色剂同时检测的方法，所述的着色剂为：吖啶黄、溶剂蓝35、溶剂红49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、颜料橙5、颜料红53、氯化五甲基副玫瑰苯胺、苏丹红Ⅱ、氯化六甲基副玫瑰苯胺、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、分散黄3、苏丹Ⅰ；其特征在于：检测步骤如下：

（1）盐溶液的配制

将醋酸铵加入到甲醇和水的混合溶液中，甲醇与水的体积比为1︰1，醋酸铵充分溶解后得甲醇-水醋酸铵溶液，醋酸铵浓度为50 ~250 mmol/L；

将醋酸铵加入到水中充分溶解，制得浓度为10～50 mmol/L的醋酸铵溶液；

（2）标准溶液的配制

分别等量称取吖啶黄、溶剂蓝35、溶剂红49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、颜料橙5、颜料红53、氯化五甲基副玫瑰苯胺、苏丹红Ⅱ、氯化六甲基副玫瑰苯胺、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、分散黄3、苏丹Ⅰ并置于同一容量瓶中，用体积比为1︰1的甲醇和四氢呋喃溶液充分溶解并定容至刻线，配制成各目标物浓度均为20 μg/mL的混合标准溶液，再用体积比为1︰1的甲醇和四氢呋喃溶液逐级稀释配制一系列各目标物浓度分别为5、2、1、0.5、0.2 μg/mL的混合标准溶液，用于标准曲线的绘制；   

（3）样品溶液的制备：

称取待测化妆品样品置于离心管中，向离心管内加入四氢呋喃，待测化妆品与四氢呋喃的用量比为0.2 g︰6 mL，涡旋并超声10 min，使样品分散或用80 ℃水浴并适当加热1~2 min，提取目标物，向离心管中加入第（1）步所得的甲醇-水醋酸铵溶液，四氢呋喃与甲醇-水醋酸铵溶液的用量比为6 mL︰4 mL，使提取溶液定容至四氢呋喃与甲醇-水醋酸铵溶液之和，涡旋混匀后超声10 min，然后于5000 r/min离心10 min；取澄清提取液，经0.45 μm微孔滤膜过滤后待测；

（4） 液相色谱分析,  参考条件如下：

色谱柱：poroshell 120 EC-C₁₈，2.7μm，3.0 mm×100 mm或者相当者；柱  温：35 ℃；流  速：0.5 mL/min；进样量：2 μL；用DAD检测器检测波长：416 nm、514 nm、590 nm；流动相：A为第（1）步制得的 10～50 mmol/L 醋酸铵溶液，B 乙腈，梯度洗脱；

（5）质谱确证，参考条件如下：

液相色谱条件：色谱柱：poroshell 120 EC-C₁₈，2.7 μm，3.0 mm×100 mm或者相当者；流  速：0.5 μL/min；进样量：2 μL；流动相：A 水相溶液，负模式为10mmol/L 醋酸铵溶液；正模式为0.33‰甲酸溶液，B 有机相溶液，负模式为乙腈和甲醇，乙腈和甲醇的体积比为6︰4；正模式为乙腈，梯度洗脱；

质谱参考条件：离子源：电喷雾电离源（ESI源）；检测方式：多反应监测（MRM）；雾化气：氮气，35 Psi；干燥气：氮气，流速10 L/min，温度:350 ℃；碰撞气：氮气；碰撞电压：380V；毛细管电压：4000 V；其他质谱参数如下：

目标物的质谱分析参考参数

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（6）定性分析

分别将第（2）步取得的标准溶液和第（3）步取得的样品溶液按照第（4）步所述最优液相分析参考条件进行分析，将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰，并且其扣除背景后的紫外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致，则可初步认定样品中存在该物质；经液相色谱法确定为阳性的样品，必须经第（5）步所述的质谱确证参考条件进行质谱分析进一步确证；

（7）定量测定

移取第（2）步系列标准溶液，按照第（4）步色谱条件进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线；吖啶黄和分散黄3根据416 nm下的紫外吸收进行定量计算，颜料红53、溶剂红49、颜料橙5、苏丹Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、碱性紫10根据514 nm下的紫外吸收进行定量计算，酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、氯化五甲基副玫瑰苯胺、氯化六甲基副玫瑰苯胺、溶剂蓝35根据590 nm下的紫外吸收进行定量计算；

鉴于碱性紫10实为溶剂红49的盐酸盐，在本方法中与溶剂红49的出峰时间相同，方法无法分辨是碱性紫10或溶剂红49。

2.除非已知，否则为统一测试结果，建议选择溶剂红49作为标准物质，测试结果则报告以溶剂红49计的含量；

样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法确定；化妆品样品中目标物的含量按“公式(1)”进行计算；

式中：C——从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度，μg/mL；

          V——按稀释倍数折算的被测样液总体积，mL；

          m ——称取样品的质量，g；

计算结果保留三位有效数字；

若待测溶液中目标物的质量浓度超过校准曲线线性范围的上限，须对待测液进行适当稀释后重新测定。