[发明专利]制备自体造血干细胞的方法、试剂盒、干细胞及应用

权利要求书

1.一种制备自体造血干细胞的方法，包括：

将体细胞在细胞培养液中培养3-6天，收集生成的自体造血干细胞，其中，所述细胞培养液是RPMI1640培养液，其中含有1-100μM的Y-27632（C₁₄H₂₁N₃O·2HCl）；1-100ng/mL的干细胞因子；1-100ng/mL的白细胞介素3；1-100ng/mL的白细胞介素6；1-100ng/mL的白细胞介素11；1-100ng/mL的巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）；1-100ng/mL的粒细胞集落刺激因子（G-CSF）；1-100μg/mL的岩藻多糖；1-100μg/mL的硫酸葡聚糖；1-100nM的AMD3100（1,1′-[1,4-亚苯基二(亚甲基)]-二-1,4,8,11-四氮杂环十四烷）；1-100μM的M-阿仑膦酸钠(Malendronate sodium trihydrate)；1-100μM的帕米膦酸二钠。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在RPMI1640培养液中含有10μM的Y-27632（C₁₄H₂₁N₃O·2HCl）；10ng/mL的干细胞因子；10ng/mL的白细胞介素3；10ng/mL的白细胞介素6；10ng/mL的白细胞介素11；10ng/mL的巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）；10ng/mL的粒细胞集落刺激因子（G-CSF）；10μg/mL的岩藻多糖；10μg/mL的硫酸葡聚糖；10nM的AMD3100（1,1′-[1,4-亚苯基二(亚甲基)]-二-1,4,8,11-四氮杂环十四烷）；10μM的M-阿仑膦酸钠(Malendronate sodium trihydrate)；10μM的帕米膦酸二钠。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在所述细胞培养液中的培养条件为：温度为37℃和5%的CO₂环境。

4.根据权利要求1所述的方法，所述体细胞来源于人或动物的离体组织，包括血液、骨髓液、皮肤和脂肪中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述体细胞包括脐带血细胞、胎盘细胞、皮肤细胞、血液有核细胞和/或脂肪细胞。

6.根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括：将制备得到的自体造血干细胞冷冻保存。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述冷冻保存包括：将得到的自体造血干细胞以1×10⁵个/ml至1×10⁶个/ml的细胞密度与等体积的二甲基亚砜和10%的低分子右旋糖酐的混合液混合，降温至-80℃，然后转移到-186℃的液氮中深低温保存。

8.一种用于制备自体造血干细胞的试剂盒，包括：

细胞培养液，所述细胞培养液是RPMI1640培养液，其中含有1-100μM的Y-27632（C₁₄H₂₁N₃O·2HCl）；1-100ng/mL的干细胞因子；1-100ng/mL的白细胞介素3；1-100ng/mL的白细胞介素6；1-100ng/mL的白细胞介素11；1-100ng/mL的巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）；1-100ng/mL的粒细胞集落刺激因子（G-CSF）；1-100μg/mL的岩藻多糖；1-100μg/mL的硫酸葡聚糖；1-100nM的AMD3100（1,1′-[1,4-亚苯基二(亚甲基)]-二-1,4,8,11-四氮杂环十四烷）；1-100μM的M-阿仑膦酸钠(Malendronate sodium trihydrate)；1-100μM的帕米膦酸二钠。