[发明专利]曲古抑菌素A在维持干细胞干性中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，具体地，本发明涉及曲古抑菌素A在维持干细胞干性中的用途。更具体地，本发明涉及曲古抑菌素A在维持干细胞干性中的用途、干细胞培养基、用于干细胞培养的试剂盒以及干细胞培养方法。

背景技术

干细胞，尤其是间充质干细胞（mesenchymal stem cells,or mesenchymal stromal cells,MSCs），能够促进多种损伤组织的修复，具有广泛的临床应用前景。但是，干细胞会在体外扩增时发生自主分化和衰老，即无法维持干性，从而降低了其分化形成其它更为重要的细胞如神经细胞和心肌细胞的能力，这是目前干细胞培养的突出问题，也会严重制约干细胞的临床应用。

因而，目前的干细胞培养中有效维持其干性，意义重大。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效维持干细胞干性的方法。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

表观遗传是调节干细胞干性的重要机制，不恰当的培养条件能够使Oct4、CXCR4、端粒酶等干性相关基因的表达发生表观遗传的改变，尤其是组蛋白乙酰化的改变，从而造成MSCs在体外培养时发生自主分化、干性下降。因而，预防或纠正这些基因表观遗传改变可保持或恢复MSCs的原有特性。

曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA）源自链霉菌代谢产物，是一种短链脂肪酸，具有多种生物学作用最先作为抗真菌药物使用。发明人发现，在传统MSCs培养液中添加一定剂量的TSA（例如6-50nM）能够有效地维持MSCs扩增培养过程中的组蛋白乙酰化的状态，从而能够有效地维持MSCs的性状。而在作用机制方面，TSA能够通过与Zn²⁺的螯合作用特异的、可逆的抑制哺乳动物组蛋白去乙酰化酶（HDACs）的活性，从而证明了发明人的上述发现。

由此，本发明提出了以下几个方面：

根据本发明的一个方面，本发明提出了曲古抑菌素A在维持干细胞干性中的用途。具体地，发明人发现，在传统干细胞培养基中添加一定剂量例如6-50nM的TSA，能够有效地维持干细胞扩增培养过程中的组蛋白乙酰化的状态，从而能够有效地维持干细胞的干性，避免干细胞在体外培养时发生自主分化。

其中，需要说明的是，在本文中所使用的术语“干细胞”包括所有类型的干细胞，例如间充质干细胞以及其他成体干细胞等。

根据本发明的又一方面，本发明提出了一种干细胞培养基。根据本发明的实施例，该干细胞培养基包含：基础培养基；以及6-50nM的曲古抑菌素A。发明人惊奇地发现，利用本发明的干细胞培养基进行干细胞培养，能够有效地维持干细胞扩增培养过程中的组蛋白乙酰化的状态，从而能够有效地维持干细胞的干性，减少干细胞体外培养过程中的自主分化，减缓衰老进程，则经过体外扩增培养获得的干细胞将更有效地用于干细胞移植等临床治疗。

另外，根据本发明上述实施例的干细胞培养基还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，基础培养基的种类不受特别限制，可以根据所要培养的干细胞的种类，选择合适的基础培养基。根据本发明的实施例，所述基础培养基为选自DMEM、IMDM和MEM的至少一种。根据本发明的一些具体示例，对间充质干细胞进行培养所采用的本发明的干细胞培养基中所包含的基础培养基为低糖DMEM。

根据本发明的实施例，本发明的干细胞培养基中曲古抑菌素A的浓度不受特别限制，只要在6-50nM范围内，该干细胞培养基均能够满足干细胞干性维持的要求。根据本发明的一些具体示例，所述干细胞培养基含有6.25-12.5nM所述曲古抑菌素A。根据本发明的另一些实施例，所述干细胞培养基含有6.25nM所述曲古抑菌素A。由此，本发明的干细胞培养基维持干细胞干性的效果更好，利用该培养基进行干细胞培养，干细胞在体外扩增时自主分化现象少，衰老速度慢，进而获得的干细胞能够有效地用于干细胞移植等临床治疗中。