[发明专利]一种酯肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学合成肽领域，特别涉及一种酯肽的制备方法。 

背景技术

FK224是Fujisawa(Originator)研发的一种环肽类物质，动物体内试验显示其具有强大的NK-1和NK-2受体拮抗效应，对两种受体的作用强度相似。但在用离体平滑肌进行的试验中，其对NK-2受体的亲和力比对NK-1受体低。临床试验表明:FK224可抑制由吸入缓激肽引起的哮喘支气管收缩，但对NKA诱发的支气管收缩则不起作用。 

FK224是一个七肽化合物，其结构如式Ⅰ所示： 

式Ⅰ。 

中国专利CN89102100中采用发酵的方法先得到WS9326A，然后通过还原的方法得到FK224。该方法用到的起始物料WS9326A必须经过发酵和多步纯化才能得到，由于发酵过程是在有机体中进行的，所以产品中所含杂质的结构鉴定非常困难，且杂质的去除只能在纯化阶段，从而加大了纯化的难度。而且由于发酵过程难于控制，因此，不利于工业化生产。 

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种酯肽的制备方法。该方法具有定向合成的特点，对相关杂质的分析较发酵方法有更强的可溯性和可控性，且在合成阶段可将相关杂质降低到一定的限度，降低了纯化的难度和提高了产品的收率。本发明工艺的监测只需要通过简单的Kaiser检测，操作简单，对设备要求不高。 

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案： 

本发明提供了一种结构如式Ⅰ所示的酯肽的制备方法，包括如下步骤： 

步骤1：取羧基端具有第一保护基的Asp的侧链羧基与氨基树脂发生脱水缩合反应，获得第一树脂； 

步骤2：在第一树脂的氨基端逐步偶联allo-Thr，D-Phe，Leu，N-甲基-2,3-脱氢-Tyr，氨基端具有第二保护基、侧链具有第三保护基的Thr，获得第二树脂； 

步骤3：取第一脱除剂去除第二树脂中Thr的第三保护基，取Thr的侧链羟基与氨基端具有第四保护基的Ser的羧基发生脱水反应，获得第三树脂； 

步骤4：取第二脱除剂去除第三树脂中Asp的第一保护基，取所述第一脱除剂脱除第三树脂中Ser的第四保护基，将Asp的羧基与Ser的氨基通过偶联剂发生脱水缩合反应连接成环，获得第四树脂； 

步骤5：去除第四树脂中Thr的第二保护基，将3-（2-戊基）-苯丙酸与Thr的氨基端发生脱水缩合反应，获得肽树脂； 

步骤6：取肽树脂裂解、沉淀获得粗肽，粗肽经纯化后，即得； 

式Ⅰ。 

作为优选，本发明提供的一种结构如式Ⅰ所示的酯肽的制备方法中，第一保护基为OAll；第二保护基为Fmoc；第三保护基为trt；第四保护基为Trt。 

作为优选，本发明提供的一种结构如式Ⅰ所示的酯肽的制备方法中，allo-Thr的侧链保护基为tBu。 

作为优选，本发明提供的一种结构如式Ⅰ所示的酯肽的制备方法中，N-甲基-2,3-脱氢-Tyr的侧链保护基为Boc。 

作为优选，本发明提供的一种结构如式Ⅰ所示的酯肽的制备方法中，Ser的侧链保护基为tBu。 

作为优选，氨基树脂选自Rink amide树脂、Rink amide MBHA树脂、Rink amide-AM树脂或Sieber树脂。 

作为优选，氨基树脂的替代度为0.1~1.0mmol/g。 

优选地，氨基树脂的替代度为0.2~0.8mmol/g。 

更优选地，氨基树脂的替代度为0.3~0.6mmol/g。 

作为优选，本发明提供的一种结构如式Ⅰ所示的酯肽的制备方法中，步骤3中第一脱除剂为TFA与DCM的混合溶液。 

优选地，TFA和DCM中TFA的体积比为1~10%，优选5%~10%。 

作为优选，第一脱除剂与第二树脂混合后于常温搅拌反应0.2~2h。 

作为优选，本发明提供的一种结构如式Ⅰ所示的酯肽的制备方法中，步骤4中第二脱除剂为Pd（Ph₃P）₄、苯硅烷和DCM的混合溶液。 

优选地，Pd（Ph₃P）₄、苯硅烷和DCM中Pd（Ph₃P）₄的摩尔用量为第一保护基的0.1~0.6倍；苯硅烷的摩尔用量为第一保护基的10~20倍。 

优选地，第二脱除剂与第三树脂于常温搅拌反应0.5~1h。