[发明专利]NPC1基因突变的检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于基因技术领域；更具体地，本发明涉及NPC1基因突变的检测方法和试剂盒。

背景技术

胆固醇是哺乳动物细胞内的一种至关重要的脂质。它具有调节胞膜活动的独特理化性质，并且是甾类激素、羟固醇和维生素D的前体。胆固醇的失调会引发多种病变。

在正常细胞中，低密度脂蛋白经受体介导内吞到达早期内体。随着胞内体的pH值下降，逐渐获得各种酸性水解酶，形成晚期内体。在晚期内体中，低密度脂蛋白颗粒解体，胆固醇酯在酸性水解酶的作用下水解，释放出游离的胆固醇。这些胆固醇大部分被运送到质膜，还有一部分到达内质网和其它位点。C型1类尼曼-匹克蛋白(NPC1)是一个跨膜脂质泵，它能监测细胞内胆固醇水平的变化，通过改变小泡转运方式或直接参与脂质跨膜转运来调节细胞脂质的平衡。它能促进脂质(特别是胆固醇)从晚期内体/溶酶体转运到高尔基复合体、内质网和细胞膜(Vance,J.E.,Lipid imbalance in the neurological disorder,Niemann-Pick C disease.FEBS Lett,2006.580(23):p.5518-24)。NPC1蛋白几乎在每一种组织中都有表达(Dieschy,J.M.and S.D.Turley,Control of cholesterol turnover in the mouse.J Biol Chem,2002.277(6):p.3801-4)。

NPC1蛋白是细胞晚期内体中含有的一种跨膜糖蛋白，由1278个氨基酸组成，分子量为142kDa，包含13个跨膜区域。其中在第3个和第7个跨膜区域之间含有固醇感受域(SSD)，类似于内质网中的固醇感受蛋白，它能识别蛋白质环境中的游离固醇并参与介导溶酶体中胆固醇的流出。NPC1还包含8个保守的半胱氨酸和1个亮氨酸拉链结构，后者介导蛋白质二聚化，而前者类似于一个环指模体，参与蛋白质-蛋白质或蛋白质-脂质之间的相互作用。

已有研究证实，NPC1基因的突变与C型尼曼-匹克病(NPC)的发生密切相关。NPC是一种罕见的常染色体隐性遗传的神经脂质沉积症。发病率大约为1:150,000。患病个体通常在成年之前去世，并且至今尚无有效的治疗方法。临床表现为肝脾肿大以及神经退行性疾病，包括眼肌麻痹、运动失调、肌张力障碍和痴呆等。生物学上表现为因细胞内胆固醇转运障碍而导致的未酯化胆固醇在溶酶体和高尔基体内的堆积。目前，NPC被认为是由C型1类尼曼-匹克基因(NPC1)或C型2类尼曼-匹克基因(NPC2)的突变所导致的，其中95%的患者是由NPC1基因突变所致，目前已经被发现的突变达到200多个(Chang,T.Y.,et al.,Niemann-Pick type C disease and intracellular cholesterol trafficking.J Biol Chem,2005.280(22):p.20917-20；Tamura,H.,et al.,Niemann-Pick type C disease:novel NPC1 mutations and characterization of the concomitant acid sphingomyelinase deficiency.Mol Genet Metab,2006.87(2):p.113-21)。