[发明专利]一种检测或辅助检测放射性肺纤维化的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测或辅助检测放射性肺纤维化的试剂盒。

背景技术

肺纤维化是一种以弥漫性肺炎和肺泡结构紊乱并导致肺间质纤维化为特征的疾病。放射性肺纤维化(Radiation pulmonary fibrosis，RPF)是临床胸部肿瘤放疗、骨髓移植预处理及急性放射病最常见的并发症之一，已成为目前放射医学研究的热点之一。传统观点认为，肺部受照后，原位的成纤维细胞增殖和肺泡上皮细胞转化为间质细胞是纤维化形成的关键。然而对于博莱霉素、病毒等诱导的肺纤维化的研究发现，一种来源于骨髓、游走于外周血、具有分化能力的细胞——纤维细胞(Fibrocytes，也可以称为纤维干细胞)对受损肺组织的过度修复是上述肺纤维化发病的重要机制之一。电离辐射属于物理损伤，在引起肺纤维化过程中与化学及生物因素的作用具有较大差异。

纤维细胞是一种游走于外周血的骨髓来源的干细胞，在多种类型的纤维化中起重要作用，该细胞表达多种趋化因子受体，分泌细胞外基质蛋白，可分化为成纤维细胞、肌成纤维细胞、脂细胞等其他间质细胞。I型胶原(collagen I，Col I)、CD34及CD45等是纤维细胞的特征性标志物。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测或辅助检测放射性肺纤维化的试剂盒。

本发明提供的试剂盒，包括用于检测纤维细胞的数量的装置和用于检测纤维细胞的数量的试剂。

上述试剂盒还包括用于检测趋化因子含量的试剂盒和用于检测趋化因子含量的装置；

所述趋化因子具体为单核细胞趋化蛋白-1(CCL2/MCP-1)和/或巨噬细胞炎性蛋白-1α(CCL3/MIP-1α)。

上述试剂盒中，所述用于检测纤维细胞的数量的装置为流式细胞仪；

所述用于检测纤维细胞的数量的试剂为如下1)-3)中任一一种：

1)荧光标记物1标记的抗CD45抗体、荧光标记物2标记的抗I型胶原蛋白抗体和IV型胶原酶；

2)荧光标记物1标记的抗CD45抗体、抗I型胶原蛋白(collagen I，Col I)抗体和荧光标记物2标记的抗I型胶原蛋白抗体的二抗和IV型胶原酶；

3)荧光标记物1标记的抗CD45抗体、抗I型胶原蛋白抗体、荧光标记物2标记的抗CD45抗体的二抗和IV型胶原酶。

所述用于检测趋化因子含量的试剂盒为细胞因子检测试剂盒；所述用于检测趋化因子含量的试剂盒具体为小鼠细胞因子液相悬浮芯片检测试剂盒；

所述用于检测趋化因子含量的装置为液相悬浮芯片仪。

IV型胶原酶的酶量为200U/mg，酶活定义为在37℃，Ph7.5条件下作用于天然胶原蛋白，以每小时从胶原蛋白中释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位(U)。

所述用于检测趋化因子含量的装置为液相悬浮芯片仪。

上述试剂盒中，所述荧光标记物1和所述荧光标记物2为不同的荧光标记物；

所述荧光标记物1或所述荧光标记物2具体均为APC和FITC中的任意一种，且二者不同。

上述试剂盒中，所述抗CD45抗体为抗小鼠CD45抗体；

所述抗I型胶原蛋白抗体为抗小鼠I型胶原蛋白抗体。

上述试剂盒中，所述用于检测纤维细胞的数量的试剂为APC标记抗小鼠CD45抗体、抗小鼠I型胶原蛋白抗体、FITC标记抗抗小鼠I型胶原蛋白抗体的二抗和IV型胶原酶。

上述试剂盒中，所述APC标记抗小鼠CD45抗体为APC标记大鼠抗小鼠CD45抗体；

所述抗小鼠I型胶原蛋白抗体为兔抗小鼠I型胶原蛋白抗体；

所述FITC标记抗小鼠I型胶原蛋白抗体为FITC标记兔抗小鼠I型胶原蛋白抗体的二抗。

上述的试剂盒在制备检测或辅助检测放射性肺纤维化的产品中的应用也是本发明保护的范围。

本发明的实验证明，本发明提供的试剂盒，可以通过检测纤维细胞的数量、CCL2/MCP-1和CCL3/MIP-1α的含量来检测小鼠是否为放射性肺纤维化，其检测方法简单，可用来检测或辅助检测待测样本是否为放射性肺纤维化，为放射性肺纤维化的诊断提供了新的检测标准，为该疾病的机制及防治提供新的线索。

附图说明

图1为小鼠胸部照射后肺HE染色(400)

图2为小鼠胸部照射后肺三色染色(400)

图3为小鼠胸部照射后肺实质中纤维细胞改变

图4为小鼠胸部照射后肺灌洗液中趋化因子改变

具体实施方式